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江蘇科特商貿有限公司

細胞培養(yǎng)的基本技術

時間:2014-12-4閱讀:265
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一、清洗 

新采用和重新使用的培養(yǎng)器皿,都要嚴格清洗,以防各種有害物質對培養(yǎng)細胞損害。培養(yǎng)用的塑料器皿目前主要依靠進口,均已無菌密封包裝,可直接使用。對于塑料瓶蓋或膠塞等,可水中浸泡后用2NaOH煮沸1020min,自來水中浸泡和蒸餾水漂洗23次,晾干備用。細胞培養(yǎng)中的絕大部分器皿系玻璃制品,清洗過程為以下步驟。 
1.浸泡 新使用或重復使用的玻璃器皿須經5%鹽酸溶液或自來水浸泡過夜或煮沸30min,水洗。以去除新購進玻璃器皿所帶有灰塵、鉛、砷等物質,并消除其弱堿性。 
2.刷洗 浸泡后用軟毛刷和的洗潔精進行刷洗。 
3.酸浸 刷洗后的玻璃制品酸浸前須適當晾干或烘干,以免造成酸浸液稀釋,影響效果。將玻璃制品*浸泡入清潔液中24h。清潔液具有*酸蝕作用,操作過程需戴防護用具。 
4.沖洗 浸酸后的玻璃器皿先用自來水充分沖洗,吸管需沖洗10min,器皿需每瓶灌滿自來水、倒掉反復10次以上,不留任何酸浸液殘跡,然后用蒸餾水漂洗23次,烘干備用。要求干凈透明,無油煙,不能殘留任何有害物質及化學藥品等。 
    二、消毒 
1. 包裝 器材經清洗烤干或晾干后,先應嚴格包裝,然后再行消毒滅菌處理,以防止消毒滅菌后再次遭受污染。包裝材料常用包裝紙、牛皮紙、硫酸紙、棉布、鋁飯盒、玻璃或金屬制吸管筒、紙繩等。 
2. 消毒 消毒滅菌隨物品的不同,而采用不同的方法。 
1)紫外線:主要用于消毒實驗室空氣、工作臺面和一些不能使用其他方法消毒的培養(yǎng)器皿。進無菌室前或做完實驗后,均應開燈照射30min進行消毒。紫外線照射60min可以消滅空氣中大部分細菌。 
2)消毒劑:操作者的皮膚、培養(yǎng)瓶的蓋和外壁常用碘酒、酒精消毒。無菌室內桌椅和物體的消毒可用0.1%新潔爾滅、過氧乙酸、來蘇兒等擦拭或浸泡。實驗室、無菌室的消毒可用甲醛熏蒸(*57.5g,加40%甲醛1015ml,混合放入一開放容器內,立即可見白色甲醛煙霧,房間密閉24h即可)。 
3)干熱消毒:多用于玻璃器皿消毒,干熱烤箱1804560min。 
4)濕熱消毒:培養(yǎng)液、橡膠制品、塑料器皿等用68kPa115)高壓滅菌10min;布類、玻璃制品、金屬器械等用103kPa121.3)高壓滅菌1520min。 
5)濾過消毒:用孔徑200450nm大小的濾板可除去培養(yǎng)液和 試劑 中的細菌和霉菌等。用200nm孔徑的濾板通過兩次,可使支原體達到某種程度的去除,但不能除去病毒。濾器分為負壓和加壓式兩種。過濾的液體量很少時,可選用注射器微量濾膜濾器。 
660Co照射:不耐熱的塑料制品或一次性用品的滅菌可經包裝后,用γ射線照射消毒。 
    三、無菌操作 
    無菌操作是防止污染、決定培養(yǎng)是否成功的首要條件。由于體外培養(yǎng)細胞缺乏抗感染能力,在一切操作中要努力做到zui大限度的無菌。工作前對手部需清洗消毒,進無菌操作室時戴口罩和穿工作服。不能用手直接觸及已消毒器皿內部。打開培養(yǎng)瓶前或封閉瓶口前須火焰燒灼瓶口等。

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