操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)。
中文名稱：蛋白磷酸酶抑制劑混合液Ⅰ
英文名稱：Phosphotase Inhibitor Cocktail 1
產(chǎn)品規(guī)格：1mL
發(fā)貨周期：1～3天
產(chǎn)品貨號(hào)：BJ-F0164767
生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中，常常需要從液體樣品(如血漿，培養(yǎng)基)中純化病毒，但由于病毒顆粒十分細(xì)小，傳統(tǒng)的分離方法是使用長(zhǎng)時(shí)間超速離心才能將其從液體樣品中分離出來(lái)，此操作非常繁瑣，并且病毒在此過(guò)程中容易變性。為了克服傳統(tǒng)方法的缺點(diǎn)，本公司開(kāi)發(fā)了本產(chǎn)品。
產(chǎn)品介紹：
組織/細(xì)胞裂解時(shí)會(huì)釋放出大量?jī)?nèi)源性蛋白磷酸酶，以各種方式催化磷酸化蛋白的去磷酸化，導(dǎo)致不同于正常生理狀態(tài)的差異，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此，加入外源性蛋白磷酸酶抑制劑，抑制磷酸化蛋白的去磷酸化，維持蛋白質(zhì)的磷酸化狀態(tài)，是Western Blotting、免疫共沉淀檢測(cè)磷酸化蛋白質(zhì)和蛋白活性測(cè)定等研究*的一步。本產(chǎn)品就是針對(duì)這一用途開(kāi)發(fā)。 產(chǎn)品特點(diǎn)： 1．即開(kāi)即用，不需要單獨(dú)購(gòu)買每個(gè)成分然后再配制。 2．由5種蛋白磷酸酶抑制劑(釩酸鈉、氟化鈉、鉬酸鈉、酒石酸鈉、咪唑)組成，各成分的濃度經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化。 3．抑制譜廣，能特異性地抑制絲磷酸酶、蘇磷酸酶、酪磷酸酶、酸性磷酸酶、堿性磷酸酶和ATP酶。 4．與各種細(xì)胞裂解液兼容。 5．使用簡(jiǎn)單，在細(xì)胞裂解液中按一定比例加入即可(根據(jù)蛋白磷酸酶決定，一般按1/100的體積比)。 6．適用于Western blot、免疫共沉淀檢測(cè)磷酸化蛋白質(zhì)、蛋白活性測(cè)定等試驗(yàn)。 儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。 使用方法： 1.在臨用前溶解本產(chǎn)品，并按1/100的比例加入到細(xì)胞裂解液中(1mL細(xì)胞裂解液中加入10μl)。注意：對(duì)蛋白磷酸酶含量特別豐富的組織，可以將加入比列提高到1/20-1/50。 2.后續(xù)處理按常規(guī)方法進(jìn)行即可。 注意：避免反復(fù)凍融本產(chǎn)品，所以次溶化后，如果還有剩余，可將其分裝成小份凍存，每次用多少取多少。 |
使用方法：本產(chǎn)品僅用于科研
注意：標(biāo)本采集人員需按有關(guān)規(guī)定做好個(gè)人防護(hù)。咽、鼻拭子最好在發(fā)病的3天采集。
在安全柜內(nèi)將本產(chǎn)品分裝到自備的、螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的5mL旋蓋塑料管里(一級(jí)容器)。
鼻拭子的采集：將棉簽輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)退出。以同一拭子拭兩側(cè)鼻孔。將棉簽浸入上步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
咽拭子的采集：用棉簽擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將棉簽浸入第一步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
直接在一級(jí)容器上用油性記號(hào)筆寫明樣本的種類、采樣時(shí)間、編號(hào)、患者姓名。
將密閉后的標(biāo)本放入大小適合的塑料袋內(nèi)密封；每袋裝一份標(biāo)本。同時(shí)也將標(biāo)本有關(guān)信息填在標(biāo)本送檢表上，連同一級(jí)容器封于塑料袋內(nèi)。
將裝標(biāo)本的密封袋放入自備的帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料容器(二級(jí)容器)內(nèi)，擰緊蓋，在容器上標(biāo)明有關(guān)信息。同一患者2份以上的密封標(biāo)本，可以放在同一個(gè)二級(jí)容器內(nèi)。二級(jí)容器要承受不少于95 KPa的壓力，內(nèi)襯具吸水和緩沖能力的物質(zhì)。所有容器必須印有生物危險(xiǎn)標(biāo)注。
將二級(jí)容器擺放在專用運(yùn)輸箱內(nèi)(或疫苗運(yùn)輸箱)，放入冰排，然后以柔軟物質(zhì)填充，并密封，由專人(2人)運(yùn)送，不得郵寄，最好使用專車。
采集的標(biāo)本若不能在24小時(shí)內(nèi)送達(dá)，則應(yīng)盡快在-70℃以下保存。無(wú)-70℃條件的，需在4℃冰箱短時(shí)間暫存，并盡快聯(lián)系遞送標(biāo)本。流感病毒在-20℃～-40℃時(shí)不穩(wěn)定，故長(zhǎng)期保存最好在-70℃溫度以下進(jìn)行。
分子生物級(jí)溴化乙錠（Ethidium Bromide）染色液
（1毫克/毫升）或（10毫克/毫升）
SYBR綠色熒光核酸染色試劑盒（配制25毫升/次）
SYBR綠色熒光核酸染色（20X）
溴酚藍(lán)（BROMPHENOL BLUE）溶液（100毫克/毫升）
小鼠胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子(TARC/CCL17)elisa ，英文名： TARC/CCL17 ELISA Kit
牛β羥(βOHB)ELISA檢測(cè)試劑盒BovineBeta-HydroxybyricAcid,β-OHBELISAKit 96T/48T
人8異前列(8-iso-PG)免疫試劑盒 Human 8-iso prostaglandin,8-iso-PG ELISA Kit
英文名稱MouseIerleukin-1α,IL-1αELISAkit小鼠白介素1α(IL-1α)規(guī)格：96T/48T
冰凍切片組織CASPASE-10蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次
Ratclusterofdiffereiation8,CD8elisa大鼠CD8分子(CD8)elisa規(guī)格：96T/48T
蛋白磷酸酶抑制劑混合液Ⅰ小鼠Ⅲ(FⅢ)elisa分析檢測(cè)試劑盒
小鼠Ⅱ(FⅡ)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠Ⅱ(FⅡ)elisa分析檢測(cè)試劑盒
小鼠Ⅱ(F2)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠Ⅰ(FⅠ)elisa檢測(cè)試劑盒
注意事項(xiàng)：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
