可保種型藍白T載體
名稱 | 規(guī)格 | 價格 | 手冊 |
可保種型藍白T載體 | 50ng | 1190元 |
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T載體是克隆PCR擴增產(chǎn)物*的工具，但是由于市場上的各種T載體質(zhì)量參差不齊，用戶很難購買到滿意的產(chǎn)品；同時購買的T載體為線性DNA，不能保種，必須反復(fù)購買，累計成本很高。為解決這一問題，LMAI Bio特推出一站式T載體制備試劑套裝，它含有除限制性內(nèi)切酶以外的、制備T載體所需要的所有試劑，包括可以在轉(zhuǎn)化宿主細菌后*保存的環(huán)形T載體質(zhì)粒DNA。用戶可以在方便的時候自己制備高質(zhì)量的T載體，再也不必因為T載體質(zhì)量不好而煩惱。
1. 一次購買，終身擁有。本產(chǎn)品提供制備T載體用的環(huán)形質(zhì)粒DNA，可以象其他質(zhì)粒一樣保種并長期保存。需要時隨時制備，十分方便。
2. 一站式自助型。本產(chǎn)品含有轉(zhuǎn)化試劑，質(zhì)粒DNA制備試劑和膠回收試劑，用戶只需要提供XcmI限制性內(nèi)切酶和基本分子生物學實驗條件，就可以自己制備T載體。整個過程只需要兩天。
3. T載體含T率為100%。本產(chǎn)品不是使用Taq DNA聚合酶或TdT加尾法制備T載體，而是使用XcmI酶切法。質(zhì)粒的多克隆位點上預(yù)先插入了一段位點經(jīng)過精心設(shè)計的片段，用XcmI酶將此1.3 Kb片段切除后將得到兩端都是T突出的載體DNA（即T載體），所以含T率遠高于用其它方法得到的T載體。
4. 方便各種下游操作。用本產(chǎn)品得到的克必隆藍白T載體插入位點兩側(cè)有多種常見的酶切位點，便于后續(xù)克隆。
5. XcmI位點在a互補區(qū)，可以使用藍白斑篩選重組子；兩邊還有T7和SP6 RNA聚合酶啟動子，便于制備RNA探針。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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