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廣電計(jì)量檢測(cè)集團(tuán)股份有限公司

組織芯片免疫組化服務(wù) 實(shí)驗(yàn)耗材

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具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 公司名稱上海宸功生物技術(shù)有限公司
  • 品       牌
  • 型       號(hào)
  • 所  在  地上海
  • 廠商性質(zhì)生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間2023/8/9 9:42:16
  • 訪問(wèn)次數(shù)1501
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ELISA(酶聯(lián)免疫)試劑盒是上海宸功生物的主營(yíng)產(chǎn)品,ELISA kit欄目提供該類目產(chǎn)品說(shuō)明書以及提供產(chǎn)品報(bào)價(jià)與網(wǎng)上訂購(gòu)。
上海宸功生物科技有限公司經(jīng)過(guò)數(shù)年的努力發(fā)展已迅速成為集產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)、經(jīng)營(yíng)為一體的專業(yè)化生物工程公司。公司具有具有完善的實(shí)驗(yàn)技術(shù)開(kāi)發(fā)平臺(tái),成熟的抗原、抗體研發(fā)系統(tǒng),熟練掌握各種酶聯(lián)技術(shù),結(jié)合公司的研發(fā)團(tuán)隊(duì),可以有效的保證公司產(chǎn)品強(qiáng)的穩(wěn)定性和高的準(zhǔn)確性,同時(shí)又具有Z有競(jìng)爭(zhēng)力的價(jià)格。公司目前主要提供生化試劑、分子生物學(xué)試劑及試劑盒,各種抗體及免疫學(xué)試劑盒、實(shí)驗(yàn)耗材等多門類上萬(wàn)種產(chǎn)品,產(chǎn)品涉及分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生命科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域。

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組織芯片免疫組化服務(wù)免疫組化,是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理——抗原抗體反應(yīng),即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì)),對(duì)其進(jìn)行定位、定性及相對(duì)定量的研究,稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)(immunocytochemistry)。
組織芯片免疫組化服務(wù) 實(shí)驗(yàn)耗材 產(chǎn)品信息

1、載玻片的處理:

 

抗原修復(fù)過(guò)程中,由于高溫、高壓、輻射等諸多因素的影響,極易造成脫片。為保證試驗(yàn)的正常

 

進(jìn)行,可選用我公司提供的 ZLI-9001 APES、ZLI-9003 HistogripTM 或 ZLI-9005 Poly-L-Lysine 等幾種

 

試劑,對(duì)已清洗的載玻片進(jìn)行處理。具體方法如下:

 

1.1 APES:現(xiàn)用現(xiàn)配。將洗凈的玻片放入以 1:50 比例丙酮稀釋的 APES 中,停留 20~30 秒鐘,取出

 

稍停片刻,再入純丙酮溶液或蒸餾水中涮去未結(jié)合的 APES,置通風(fēng)櫥中晾干即可。用此載玻片撈片

 

時(shí)應(yīng)注意組織要一步到位,并盡量減少氣泡的存在,以免影響染色結(jié)果。

 

1.2 HistogripTM:將洗凈的玻片放入以 1:50 比例丙酮稀釋的 Histogrip 液中,停留 1~2 分鐘,然后用雙

 

蒸水快速清洗三次,室溫干燥或 60oC 烤箱烘烤一小時(shí),裝盒備用。

 

1.3 Poly-L-Lysine:將洗凈、干燥的載玻片放入以 1:10 比例去離子水稀釋的多聚賴氨酸溶液中,浸泡

 

5 分鐘,60oC 烤箱烘烤一小時(shí)或室溫過(guò)夜干燥。裝盒備用。試驗(yàn)中使用的器具均為非玻璃制品。

 

2、常用酶消化:

 

2.1 胰蛋白酶:一般使用濃度為 0.05%~0.1%,消化時(shí)間為 37℃、10~40 分鐘,主要用于細(xì)胞內(nèi)抗原的

 

顯示。

 

2.2 胃蛋白酶:一般使用濃度為 0.4%,消化時(shí)間為 37℃、30~180 分鐘,主要用于細(xì)胞間質(zhì)抗原的顯示,

 

如:Laminin(層粘蛋白),Collagen IV(IV 型膠原)等。

 

2.3 皂素(Saponin):一般使用濃度為 2~10m g/ml 的 saponin 溶液,消化時(shí)間為室溫孵育 30 分鐘。

 

3、抗原熱修復(fù):

 

可根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的具體條件,選用微波爐抗原修復(fù)、高壓鍋抗原修復(fù)或水浴高溫抗原修復(fù)??乖瓱?/span>

 

修復(fù)可選用各種緩沖液,如 TBS、PBS、重金屬鹽溶液等,但實(shí)驗(yàn)證明,以 0.01M枸櫞酸鹽緩沖液(pH6.0)

 

效果。請(qǐng)選用我公司提供的 ZLI-9064 枸櫞酸鹽緩沖液(粉劑)配制,取該粉劑一包溶于 1000ml 的蒸餾水中,混勻,其 pH 值在 6.0 ± 0.1,如因蒸餾水本身造成的 pH 值偏差,請(qǐng)自行調(diào)整。

 

3.1 石蠟切片微波爐抗原修復(fù)操作方法:切片脫蠟至水后,3%H2O2 處理 10 分鐘,蒸餾水洗 2 分鐘×

 

3。將切片放入盛有枸櫞酸鹽緩沖液(工作液)的容器中,置微波爐內(nèi)加熱使容器內(nèi)液體溫度保持 在

 

92℃~98℃之間并持續(xù) 10~15 分鐘(注意:無(wú)論是使用醫(yī)用或家用微波爐,請(qǐng)根據(jù)具體機(jī)型酌情設(shè)置

 

條件,務(wù)必滿足以上步驟中對(duì)溫度和時(shí)間的要求)。取出容器,室溫冷卻 10~20 分鐘(注意:不可將

 

切片從緩沖液中取出冷卻,以便使蛋白能夠恢復(fù)原有的空間構(gòu)型)。PBS 洗,下接免疫組化染色步驟。

 

3.2 石蠟切片高壓抗原修復(fù)操作方法:切片脫蠟至水。將 1500ml~3000ml 的枸櫞酸鹽緩沖液(工作液)

 

注入不銹鋼壓力鍋中加熱至沸騰。切片置于金屬架上,放入鍋內(nèi),使切片位于液面以下,蓋鍋壓閥。

 

當(dāng)壓力鍋開(kāi)始慢慢噴氣時(shí)(約加熱 5~6 分鐘后),計(jì)時(shí) 1~2 分鐘,然后將壓力鍋端離熱源,冷水沖至

 

室溫后,取下氣閥,打開(kāi)鍋蓋,取出切片,蒸餾水洗后,PBS 洗 2 分鐘×3,下接免疫組化染色步驟。

 

3.3 石蠟切片電爐煮沸抗原修復(fù)操作方法:切片脫蠟至水后,放入盛有枸櫞酸鹽緩沖液(工作液)的

 

容器中,并將此容器置于盛有一定數(shù)量自來(lái)水的大器皿中,電爐上加熱煮沸,從小容器的溫度到 達(dá)

 

92℃~98℃起開(kāi)始計(jì)時(shí) 15~20 分鐘,然后端離電爐,室溫冷卻 20~30 分鐘,蒸餾水沖洗,PBS 洗,下

 

接免疫組化染色步驟。

 

4、免疫組化染色步驟:

 

(以美國(guó) ZYMED 公司 SP 試劑盒為例)

 

4.1 石蠟切片脫蠟至水。

 

4.2 3%H2O2 室溫孵育 5~10 分鐘,以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性。

 

4.3 蒸餾水沖洗,PBS 浸泡 5 分鐘,(如需采用抗原修復(fù),可在此步后進(jìn)行)。4.4 5~10%正常山羊血清(PBS 稀釋)封閉,室溫孵育 10 分鐘。傾去血清,勿洗,滴加適當(dāng)比例稀

 

釋的一抗或一抗工作液,37℃孵育 1~2 小時(shí)或 4℃過(guò)夜。

 

4.5 PBS 沖洗,5 分鐘×3 次。

 

4.6 滴加適當(dāng)比例稀釋的生物素標(biāo)記二抗(1%BSA-PBS 稀釋),37℃孵育 10~30 分鐘;或滴加第二代

 

生物素標(biāo)記二抗工作液,37℃或室溫孵育 10~30 分鐘。

 

4.7 PBS 沖洗,5 分鐘×3 次。

 

4.8 滴加適當(dāng)比例稀釋的辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素(PBS 稀釋),37℃孵育 10~30 分鐘;或第二代辣根

 

酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液,37℃或室溫孵育 10~30 分鐘。

 

4.9 PBS 沖洗,5 分鐘×3 次。

 

4.10 顯色劑顯色(DAB 或 AEC)。

 

4.11 自來(lái)水充分沖洗,復(fù)染,封片。 冰凍切片免疫組化染色步驟

 

冰凍切片 4~8µm,室溫放置 30 分鐘后,入 4℃丙酮固定 10 分鐘,PBS 洗,5 分鐘×3。用 3%過(guò)氧化

 

氫孵育 5~10 分鐘,消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性。PBS 洗,5 分鐘×2。

 

服務(wù)內(nèi)容

 

(一)分析服務(wù)一

 

1.不同組數(shù)據(jù)表達(dá)量分析(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差);

 

2.利用生物作圖軟件做柱狀圖、三線表格、折線圖等(分辨率不低于600dpi)。通過(guò)生物統(tǒng)計(jì)軟件分析各組之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;給出具體p值、t值或者F值等;同時(shí)標(biāo)記在相應(yīng)柱狀圖或者三線表格中。

 

(二)分析服務(wù)二

 

1.不同組數(shù)據(jù)表達(dá)量分析(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差);

 

2.利用生物作圖軟件做柱狀圖、三線表格、曲線圖等。通過(guò)生物統(tǒng)計(jì)軟件分析各組之間的統(tǒng)

 

計(jì)學(xué)差異;給出具體p值、t值或者F值等;同時(shí)標(biāo)記在相應(yīng)柱狀圖或者三線表格中;

 

3.組合Merger圖片繪制:將各組(指標(biāo))各挑選一張典型照片,聯(lián)合柱狀圖或者折線圖,通過(guò)生物作圖軟件,繪制Merger圖片;提高圖片在文章中的反應(yīng)信息,同時(shí)降低版面占比。

 

三 客戶提供數(shù)據(jù)要求

 

1.原始數(shù)據(jù)、原始圖片(dpi≥600)及其拍照倍數(shù)(100倍、200倍或400倍);

 

2.檢測(cè)樣本的分組信息,樣本若為細(xì)胞則標(biāo)注種屬和細(xì)胞名稱,樣本若為組織則標(biāo)注檢測(cè)種

 

屬和部位;

 

3.若需要做柱狀圖和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,請(qǐng)?zhí)峁┒啻沃貜?fù)數(shù)據(jù);

 

4.若需要做柱狀圖和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,請(qǐng)?zhí)峁┟拷M樣本5個(gè)不同視野下的圖片或計(jì)數(shù)結(jié)果;

 

5.實(shí)驗(yàn)的研究?jī)?nèi)容及目的。

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