探求白細(xì)胞介素-37(interleukin-37,IL-37)在人外周血CD4~+效應(yīng)T細(xì)胞(effector T cells)中的表達(dá)情況.2.研究在脂多糖(LPS)刺激下,CD4~+效應(yīng)T細(xì)胞活化程度與IL-37表達(dá)水平的時(shí)效關(guān)系.3.證明IL-37可以抑制CD4~+效應(yīng)T細(xì)胞發(fā)揮免疫效應(yīng).方法:部分:分離健康志愿者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC),采用免疫磁珠分選分選CD4~+T淋巴細(xì)胞,通過(guò)胎盤(pán)藍(lán)檢測(cè)細(xì)胞活性,應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)CD4~+效應(yīng)T細(xì)胞純度.1.增殖活性檢測(cè):設(shè)置刺激劑組(脂多糖-LPS:1ug/ml),陰性對(duì)照組(即無(wú)LPS刺激細(xì)胞組),通過(guò)CCK-8技術(shù)檢測(cè)不同分組之間CD4~+T淋巴細(xì)胞增殖活性差異,得出刺激時(shí)間(24h,48h,72h)與細(xì)胞增殖活性時(shí)效關(guān)系.2.IL-37基因水平表達(dá)情況:通過(guò)PCR技術(shù)明確CD4~+效應(yīng)T細(xì)胞中IL-37mRNA的表達(dá).3.IL-37蛋白水平表達(dá)情況:分別通過(guò)Western blot技術(shù)和流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)LPS刺激下,不同刺激時(shí)間下(24h,48h,72h)效應(yīng)T淋巴細(xì)胞中IL-37蛋白表達(dá)水平差異.4.IL-37細(xì)胞內(nèi)表達(dá)定位:通過(guò)免疫熒光與激光掃描共聚焦技術(shù)檢測(cè)IL-37蛋白在效應(yīng)T淋巴細(xì)胞中表達(dá)情況,明確其表達(dá)位置.第二部分:分離健康志愿者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC),應(yīng)用免疫磁珠分選技術(shù)獲得CD4~+效應(yīng)T細(xì)胞,應(yīng)用小分子干擾RNA沉默效應(yīng)T細(xì)胞中IL-37的表達(dá),另設(shè)置siRNA-scramble無(wú)效干擾細(xì)胞組,正常對(duì)照細(xì)胞組
廈門(mén)侖昌碩生物科技有限公司集研發(fā)、生產(chǎn)、銷(xiāo)售、服務(wù)及品牌代理為一體的生物技術(shù)公司,目前可提供各種抗體、免疫學(xué)相關(guān)的檢測(cè)試劑盒、胎牛血清,動(dòng)物抗血清等高品質(zhì)產(chǎn)品及服務(wù),涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生命科學(xué)領(lǐng)域。
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