公司產(chǎn)品僅供科研使用,下列是產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
超氧陰離子清除能力測(cè)試盒(微量法) | 100管/96樣 | LZ-01X8382 |
商品介紹:
測(cè)定意義:
超氧陰離子自由基作為生物體代謝過(guò)程中產(chǎn)生的一種自由基,可攻擊生物大分子,如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸和聚不飽和脂肪酸等,使其交鏈或者斷裂,引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞,與機(jī)體衰老和病變有很密切的關(guān)系,清除超氧陰離子自由基的研究已經(jīng)得到了廣泛的關(guān)注。
測(cè)定原理:
AP-TEMED系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子,與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO2-,NO2-與對(duì)氨基苯磺酸和α-萘胺的作用生成紅色的偶氮化合物,在530nm處有特征吸收峰,樣品對(duì)超氧陰離子的清除能力與530nm的吸光值呈負(fù)相關(guān)。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
實(shí)驗(yàn)步驟:
(1)實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說(shuō)了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過(guò)夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無(wú)水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測(cè)RNA的質(zhì)量
(在抽提過(guò)程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
操作程序:
注意:最重要的是及時(shí)固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC處理,以抑制RNA酶對(duì)mRNA的分解作用。此外,過(guò)度固定對(duì)原位雜交有明顯的不利影響。
1.玻片的處理:一般采用多聚賴(lài)氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.細(xì)胞在多聚賴(lài)氨酸處理的蓋玻片上進(jìn)行培養(yǎng),條件為37℃和5%的CO2,所用培養(yǎng)基為Dulbecco基礎(chǔ)培養(yǎng)基。細(xì)胞長(zhǎng)好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分鐘×3次。
3.培養(yǎng)細(xì)胞和冰凍切片均可用下述方法固定:固定液為4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室溫固定 20--30分鐘。蒸餾水充分洗滌,干燥后-20℃冰凍可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+純甲醇50份混合,室溫處理30分鐘。蒸餾水洗滌3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋1ml 3% 檸檬酸加2滴濃縮型,混勻),37℃或室溫消化5—120秒鐘。有時(shí)也可以不消化。原位雜交用 PBS洗3次×5分鐘。蒸餾水洗1次。
6.后固定:消化后才需要。固定液為1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室溫固定 10分鐘。蒸餾水洗滌3次。
7.預(yù)雜交:濕盒的準(zhǔn)備——干的雜交盒底部加20%甘油20ml以保持濕度。按每張切片20μι加預(yù)雜交液。恒溫箱38-42℃2—4小時(shí)。吸取多余液體,不洗。
8.雜交——按每張切片20μι雜交液,加在切片上。將原位雜交專(zhuān)用蓋玻片的保護(hù)膜揭開(kāi)后,蓋在切片上。恒溫箱38-42℃雜交過(guò)夜(根據(jù)雜交情況可以調(diào)節(jié))。
9.雜交后洗滌:揭掉蓋玻片,37℃左右水溫的2×SSC洗滌5分鐘×2次;37℃0.5×SSC洗滌15分鐘×1次; 37℃0.2×SSC洗滌15分鐘×1次(如果有非特異性染色,重復(fù)0.2×SSC洗滌15分鐘×1-2次)。
10.滴加封閉液:37℃30分鐘。甩去多余液體,不洗
11.滴加化鼠抗*:37℃ 60分鐘或室溫120分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。
12.滴加SABC:37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×3次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。
13.滴加化過(guò)氧化物酶:37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。
14.DAB顯色:使用DAB顯色試劑盒—1ml蒸餾水加顯色劑A,B,C各一滴,混勻,加至標(biāo)本上。一般顯色20-30分鐘。若無(wú)背景出現(xiàn)則可繼續(xù)顯色。也可自配DAB顯色劑后顯色。充分水洗。
15.必要時(shí)蘇木素復(fù)染,充分水洗。
16.酒精脫水,二甲苯透明,封片。
IL2RG Protein Rat 重組大鼠 IL2RG / CD132 蛋白 (His 標(biāo)簽)
ACTH (Adrenorticotrophin hormons 0.5mgACTH (Adrenorticotrophin hormons)(18-39) 促腎上腺皮質(zhì)激素(18-39)(抗原)
BID重組小鼠 BID 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein
IL2 Protein Human 重組人 Interleukin-2 / IL-2 蛋白
CABP5重組人 CABP3 / CABP5 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
FZD4重組大鼠 Frizzled-4 / FZD4 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
EGF(Epidermal growth factor 0.5mgEGF(Epidermal growth factor)rat 重組表皮生長(zhǎng)因子抗原(大鼠)
ITGAX & ITGB2重組人 ITGAX & ITGB2 Heterodimer 蛋白 Protein
NRG1 Protein Human 重組人 NRG1-alpha 蛋白 (EGF Domain, Fc 標(biāo)簽)
ACVR2A Protein Mouse 重組小鼠 ACVR2A / ActrIIa 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)
EGF(Epidermal growth factor 0.5mgEGF(Epidermal growth factor)rat 重組表皮生長(zhǎng)因子抗原(大鼠)
NRG1 Protein Human 重組人 NRG1-alpha 蛋白 (EGF Domain, Fc 標(biāo)簽)
FZD4重組大鼠 Frizzled-4 / FZD4 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
ACVR2A Protein Mouse 重組小鼠 ACVR2A / ActrIIa 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)
ITGAX & ITGB2重組人 ITGAX & ITGB2 Heterodimer 蛋白 Protein
FCGR1 Protein Mouse 重組小鼠 CD64 / FCGR1 蛋白 (His & AVI 標(biāo)簽), Biotinylated
GLP-1/KG-31(Glucagon-like peptide-1 0.5mgGLP-1/KG-31(Glucagon-like peptide-1) peptide 胰高血糖素樣肽-1(多肽)
REG4重組大鼠 REG4 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
FCGR3A重組人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Val, His & AVI 標(biāo)簽) Protein
MSLN Protein Human 重組人 MSLN / Mesothelin 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
超氧陰離子清除能力測(cè)試盒(微量法)Guinea IgG/RBITC 羅丹明標(biāo)記豚鼠IgG 0.3ml
Phospho-5-Lipoxygenase(Ser524) 英文名稱(chēng): 磷酸化5-脂氧合酶抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh DNPK1 DNA依賴(lài)蛋白激酶催化亞基抗體 規(guī)格 0.1ml
ACA-IgA(Mouse anti-cardiolipin antibody IgA) ELISA Kit 小鼠抗心磷脂抗體IgAMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
微囊藻毒檢測(cè)試劑盒 96孔/盒 適用于水樣、藍(lán)藻、魚(yú)肉等樣品
Anti-CK5/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞角蛋白5抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml