本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號 |
糖原磷酸化酶b（GPb）測試盒紫外分光光度法 | 50管/24樣 | 紫外分光光度法 | BK-01S6985 |
商品介紹：
測定意義: 糖原磷酸化酶（Glycogen phosphorylase，GP，EC 2.4.1.1)）是糖原分解代謝的關(guān)鍵酶，使糖原分子從非還原端逐個斷開α-1，4-糖苷鍵移去葡萄糖基，釋放1-磷酸葡萄糖，直至臨近糖原分子α-1，6-糖苷鍵分支點前4個葡萄糖基處。GP分為有活性的糖原磷酸化酶a（GPa）和無活性的糖原磷酸化酶b（GPb）兩種形式。GPb在一定濃度的腺苷酸（5，-AMP）存在下可被激活。 測定原理： GP催化糖原和無機磷產(chǎn)生葡萄糖殘基生成糖原和1-磷酸葡萄糖，磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步依次催化NADP還原生成NADPH，在340nm下測定NADPH上升速率，即可反映GP活性。添加一定濃度的腺苷酸（5，-AMP）時測定GP（GPa和GPb）活性，未添加腺苷酸（5，-AMP）時測定GPa活性，GP活性－GPa活性得到GPb活性。 需自備的儀器和用品： 紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑組成和配制:
提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
實驗結(jié)果判斷我有妙招：
1、定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。
3、以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照，與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求：
① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封，放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。
② 與水蒸氣，水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封，并遠(yuǎn)離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑，應(yīng)將其固體或晶體密封保存，不宜長期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存，其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng)，所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風(fēng)處保存。
操作步驟：
1. 樣品的準(zhǔn)備：
a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測定。
2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進(jìn)行稀釋，即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進(jìn)行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
1瓶 U27細(xì)胞株 U27 低溫運輸和保存
顯色(第二代) 1000ml
100mg 遺傳 G-418 Sulfate (Geneticin) 4℃保存
50T 紅薯內(nèi)源基因PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存
30µL 植物Actin小鼠單抗 Plant Actin Mouse MAb -20℃保存
結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA） Violet Red Bile Agar 250g
2mL 巰基磁珠 Magnetic beads,Sulfydryl 4℃密閉、豎直保存
2 ug pEYFP-mem pEYFP-mem 低溫運輸，-20℃保存
大豆酪蛋白瓊脂（TSA）平板（15cm） 10個/包
1瓶 BNL CL.2細(xì)胞株 BNL CL.2 低溫運輸和保存
LB肉湯顆粒 LB Broth 300ml/袋*10
糖原磷酸化酶b（GPb）測試盒紫外分光光度法TNIP2/ABIN2/TNFAIP3 interacting protein 2 瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白3相互作用蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml
HIV gp120 艾滋毒抗體 規(guī)格: 0.1ml
FASP1/C21orf45 MaFF相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗牛IgG 規(guī)格: 0.1ml
ODZ3/Teneurin 3 固生蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-Paxillin (Tyr118) 磷酸化樁蛋白Paxillin抗體 規(guī)格: 0.1ml
PPAR-delta/beta D型-過氧化活化增生受體抗體 規(guī)格: 0.1mlABHD1 肺α/β水解蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-Lck (Tyr505) 磷酸化淋巴細(xì)胞特異性蛋白酪激抗體 規(guī)格: 0.1mlResistin 抵抗素抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-Bovine IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗牛IgM 規(guī)格: 0.1mlLRP/MVP 肺耐藥相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
C4orf42 4號染色體開放閱讀框42抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-mouse IgG/RBITC 羅丹明標(biāo)記的兔抗小鼠IgG 規(guī)格: 0.3ml
phospho-Tau protein(Thr489) 磷酸化微管相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlSmoothened/SMO 跨膜蛋白Smoothened抗體 規(guī)格: 0.1ml
APG4B/AUTL1 自噬相關(guān)蛋白4B抗體 規(guī)格: 0.2mlTUSC3 前列抑蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2ml
FRMD7 FRMD7蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-JunB(Ser259) 磷酸化活化蛋白激B抗體 規(guī)格: 0.1ml
Nox4/NADH NADPH氧化4抗體 規(guī)格: 0.1mlNF-L/Neurofilament L/Neurofilament 68 低分子量神經(jīng)絲蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
