GelStain核酸電泳染料(10,000× 水溶液)
特點:
1.相對安全:油性大分子特點使其不易穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),使用相對安全,實驗顯示在工作濃度(凝膠染色濃度)下沒有發(fā)現(xiàn)誘變性,可以代替致癌物溴化乙錠EB作為各種核酸電泳的染色劑。
2.靈敏度高:適用于各種大小片段的電泳染色,對核酸遷移的影響較小。
3.穩(wěn)定性高:適用于使用微波或其它加熱方法制備瓊脂糖凝膠;室溫下在酸或堿緩沖液中極其穩(wěn)定,耐光性強。
4.信噪比高:樣品熒光信號強,背景信號低。
5.操作簡單:在預(yù)制膠和電泳過程中不降解,可直接用可見光凝膠透射儀觀察。
6.適用范圍:可選擇電泳前染色(膠染法)或電泳后染色(泡染法);適用瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠電泳;可用于dsDNA、ssDNA 或RNA 染色。
7.儀器兼容:適用于使用254nm 激發(fā)的紫外凝膠成像系統(tǒng)或藍(lán)色可見光激發(fā)的凝膠觀察裝置。它和SYBR Green I的光譜相似,靈敏度相當(dāng),但更加穩(wěn)定。
儲存條件: 2-8℃避光干燥可保存12個月。
GelStain核酸電泳染料(10,000× 水溶液)
操作步驟:
一、瓊脂糖凝膠電泳染色(詳細(xì)方法請與銷售人員索要說明書,推薦方法)
將Nucleic Acid Dye加入凝膠中
1.制膠:常規(guī)方法制備瓊脂糖凝膠, 加入試劑使其在凝膠中的終濃度為1x (例如: 制備50ml的凝膠, 加入染料5μl),輕輕搖勻后倒膠。
2.按常規(guī)方法電泳,觀測結(jié)果。
二、泡染法
(1)按照以上常規(guī)方法進(jìn)行電泳。 用于膠回收等高濃度DNA樣品強烈推薦泡染法!
(2)將10,000×儲液稀釋約3,300倍到0.1M NaCl溶液中制成3×染色液。例如將15μL 10,000×原裝液加入到50mL 0.1M NaCl溶液中。
(3)將凝膠小心地放入合適的容器中(如聚丙烯容器中)緩慢加入足量的3× 染色液浸沒凝膠。室溫振蕩染色30min左右,最佳染色時間根據(jù)凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同而略有不同。對于含1%的凝膠,染色時間約30min。
(4)用302nm激發(fā)的紫外凝膠成像系統(tǒng)觀察結(jié)果。
*注意事項:用泡染法染色時,染料用量較多。3× SafeGreen染色液室溫避光保存,可重復(fù)使用3次左右
注意事項:請務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。
1. 由于本試劑具有良好的熱穩(wěn)定性,可以在熱的瓊脂糖溶液中直接添加,而不需要等待溶液冷卻。搖晃,振蕩或者翻轉(zhuǎn)以保證染料充分混勻。也可以選擇將儲液加到瓊脂糖粉末和電泳緩沖液中,然后用微波爐或其他常用方式加熱以制備瓊脂糖凝膠。GelStain核酸電泳染料兼容所有常用的電泳緩沖溶液。
2. 如果條帶總是彌散或分離不理想,請使用泡染法染色以確認(rèn)問題是否與染料有關(guān)。如果染色后問題依舊存在,則說明問題與染料無關(guān),請嘗試:降低瓊脂糖濃度;選用更長的凝膠;延長凝膠時間以保證邊緣清晰;改進(jìn)上樣技巧或選擇泡染法染色。
3. GelStain核酸電泳染料對玻璃器皿和非聚丙烯材料具有一定的親合力。建議在稀釋、貯存、染色等使用過程中用聚丙烯類容器。
4. 對于聚丙烯酰胺凝膠請使用泡染法。