一、 技術(shù)原理
試劑盒基于多重PCR技術(shù)(multiplex PCR)，在阪崎克羅諾桿菌同一PCR反應(yīng)體系中加入2對引物，于樣本中基因組的相應(yīng)靶位點(diǎn)特異性結(jié)合，同時(shí)擴(kuò)增出2條核酸片段的PCR反應(yīng)，其反應(yīng)原理，反應(yīng)試劑和操作過程與一般PCR相同。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖電泳和紫外儀觀察，在目標(biāo)位置處出現(xiàn)兩條特異性條帶時(shí)，即為陽性結(jié)果。
“＋”表示結(jié)果為阪崎克羅諾桿菌；“－”表示結(jié)果為非阪崎克羅諾桿菌
二、 阪崎克羅諾桿菌雙重PCR檢測試劑盒組成
組分名稱 | 規(guī)格×數(shù)量 |
干粉試劑 | 8管×3排 |
復(fù)溶液 | 600μL×1管 |
陽性對照 | 1管（凍干型） |
陰性對照 | 1管（凍干型） |
裂解液 | 1 mL×1管 |
超純水 | 1 mL×1管 |
loading buffer | 120μL×1管 |
說明書 | 1份 |
三、阪崎克羅諾桿菌雙重PCR檢測試劑盒特點(diǎn)
l 高效鑒定：通過同步擴(kuò)增阪崎克羅諾桿菌的特異靶位基因16s rDNA和外膜蛋白A基因OmpA，實(shí)現(xiàn)快速對克羅諾阪崎腸桿菌的鑒定。
l 使用簡單：產(chǎn)品試劑盒對反應(yīng)體系進(jìn)行凍干粉處理，溶解后加入樣品核酸即可進(jìn)行擴(kuò)增，減少繁瑣的溶液組分配置過程，降低人為操作帶來的結(jié)果偏差。
l 儀器要求低：具備開展分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)條件的實(shí)驗(yàn)室即可實(shí)現(xiàn)操作。
l 鑒定快速：試劑盒使用簡單，試驗(yàn)從樣品處理到得到結(jié)果3h左右即可完成。
l 特異性和靈敏度高：廣東環(huán)凱微生物科技有限公司擁有豐富的菌種資源庫，食源性致病菌菌株超過13000株。憑借豐富的菌株資源，該試劑盒經(jīng)過了十幾種超過300株的標(biāo)準(zhǔn)菌株和分離株的特異性驗(yàn)證，保證了試劑盒的檢測特異性，其檢驗(yàn)限高達(dá)300 CFU/test。
四、雙重PCR檢測操作流程（全程僅需約3小時(shí)） 
五、試劑盒操作示意圖 
六、需要配套的儀器及耗材列表
所需的儀器 | 規(guī)格 | 備注 |
移液槍、 槍頭 | 1-10 μL、10-200 μL和100-1000 μL各一把 | 槍頭推薦國產(chǎn)槍頭即可。 |
離心機(jī) | 轉(zhuǎn)速不低于12,000 rpm，離心機(jī)轉(zhuǎn)子支持200 μL和1.5 mL離心管離心。 | 建議用進(jìn)口離心機(jī)。 |
PCR儀器 | 國產(chǎn)或進(jìn)口產(chǎn)品皆可。 | 能準(zhǔn)確提供梯度變溫的PCR儀器。 |
電泳儀和電泳槽 | 國產(chǎn)上海天能公司產(chǎn)品、進(jìn)口Bio-Rad電泳儀 |
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瓊脂糖 | 西班牙瓊脂糖G-10 | 用于DNA電泳用瓊脂糖即可 |
紫外觀察儀 | 進(jìn)口UVITECH、國產(chǎn)紫外觀察儀系統(tǒng) | 需要數(shù)據(jù)記錄需要配有拍攝系統(tǒng) |
