Gelred核酸染料(10000X)-EB替代染料
由美國(guó)Biotium公司研發(fā)的GelRed和GelGreen 是兩種集高靈敏、低毒性和超穩(wěn)定于一身的的熒光核酸染色試劑。其水溶染色劑通過(guò)美國(guó)安全認(rèn)定，廢棄物可直接倒入下水道，而不會(huì)造成任何環(huán)境污染。
目前大多數(shù)商業(yè)化的核酸染料（凝膠染色試劑）總是在安全性、穩(wěn)定性和靈敏性等方面不*令人滿意。例如，雖然 EB(溴化乙啶）作為目前使用泛的核酸凝膠染色試劑，能夠在多數(shù)應(yīng)用中提供可以接受的靈敏度，但它是一種高誘變性的化學(xué)物質(zhì)，對(duì)人體潛在危害非常大。而且EB染色后會(huì)產(chǎn)生較高的背景熒光信號(hào)（如圖1）。SYBR Green I 和 SYBR Gold 也被廠家宣傳為的凝膠染色試劑。但 SYBR Green I 尤其是 SYBR Gold 在常用的微堿性電泳緩沖溶液或預(yù)制凝膠中會(huì)快速降解，穩(wěn)定性差導(dǎo)致染色效果極不可靠。 SYBR safe 被認(rèn)為是較為安全的核酸染料 ，但它的染色效果還遠(yuǎn)不及 SYBR Green I 。
常用的染色方法有預(yù)制凝膠染色（前染）和凝膠電泳后染色（后染），無(wú)論采用哪一種方法，GelRed 和 GelGreen，都能表現(xiàn)出的靈敏度。
為配合302/312 nm UV 凝膠成像系統(tǒng)而設(shè)計(jì)的 GelRed ，按照Biotium公司創(chuàng)新的試驗(yàn)步驟（該試驗(yàn)步驟中使用稀釋的 NaCl 溶液替代傳統(tǒng)的 TBE 緩沖溶液），在凝膠電泳后染色法中優(yōu)于或者至少相當(dāng)于 SYBR Gold 。但與 SYBR Gold 不同， GelRed 在預(yù)制凝膠法中使用時(shí)仍然有的靈敏度，事實(shí)上GelRed 在檢測(cè)低濃度、微量 DNA 方面比 EB 表現(xiàn)出更高的靈敏度，尤其對(duì)小分子量的 DNA 檢測(cè)非常靈敏。
如果您使用 488 nm 激光器或者LED可見(jiàn)光激成像儀，GelGreen染料則是。 GelGreen 無(wú)論是在預(yù)制凝膠（前染）還是凝膠電泳后染色（后染）中都與 SYBR Green I 靈敏度相當(dāng)，但不存在后者的不穩(wěn)定性問(wèn)題。
實(shí)際上， GelRed 和 GelGreen ，特別是 GelRed 非常穩(wěn)定，可以長(zhǎng)期在室溫下保存。當(dāng)這兩種染料稀釋在 TBE 或者類似的電泳緩沖溶液中時(shí)甚至可以使用微波爐加熱，便于采用常規(guī)方法制備預(yù)制凝膠。而含有染料的預(yù)制凝膠可以成批制備，并長(zhǎng)期保存以備用。更重要的是， GelRed 和 GelGreen 相比 EB 或 SYBR Green I 大大提高了安全性。 獨(dú)立的測(cè)試服務(wù)公司（ Litron Laboratories, Inc. ）進(jìn)行的標(biāo)準(zhǔn)艾姆斯氏測(cè)試結(jié)果表明， 在 18.5 μ g /mL （該濃度遠(yuǎn)高于推薦用于電泳后染色的 約 4 μ g/mL 的 3X 染色液 ）濃度下， GelGreen 沒(méi)有誘變性，而 GelRed 也僅在 S9 代謝活化時(shí)有微弱的誘變性。 GelRed 和 GelGreen 的特殊化學(xué)結(jié)構(gòu)使其難以穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，正是這一特性降低了染料的細(xì)胞毒性。如圖3。相反， SYBR Green I 廣泛地用于活細(xì)胞線粒體和核 DNA 染色，這正是由于它能快速的被細(xì)胞吞入。由于已知 SYBR Green I 對(duì)紫外線導(dǎo)致的突變有強(qiáng)烈的增強(qiáng)作用（ Ohta et al. Mutat. Res. 492 , 91(2001) ），因此它的高細(xì)胞膜透性使它在紫外環(huán)境觀察時(shí)成為凝膠染色的主要有害物質(zhì)。
特性:
gelred 高靈敏度
GelRed 和 GelGreen 是目前市場(chǎng)中的凝膠核酸染料
gelred 穩(wěn)定性
可以使用微波爐加熱，染料和預(yù)制凝膠可以在室溫下長(zhǎng)期保存
gelred 更安全
艾姆斯氏試驗(yàn)結(jié)果表明，該染料的誘變性遠(yuǎn)小于溴化乙錠 （ EB ） 和SYBR 系列染料
gelred 廣泛的適應(yīng)性
適用于預(yù)制凝膠法和凝膠電泳后染色法
gelred 染色過(guò)程簡(jiǎn)單
與 EB 一樣，在預(yù)制膠和電泳過(guò)程中不必?fù)?dān)心染料降解；而電泳后染色過(guò)程也只需 30 分鐘且無(wú)需脫色或沖洗
gelred 對(duì) DNA 和 RNA 的遷移影響極小
對(duì)核酸遷移的影響小于 SYBR Green I
gelred 與標(biāo)準(zhǔn)凝膠成像系統(tǒng)以及可見(jiàn)光激發(fā)的凝膠觀察裝置兼容
GelRed 可以的替代 EB，無(wú)需任何操作上的改變 ； GelGreen 足以替代任意一種 SYBR 染料，操作方法*一樣。
