一、技術路線：

（一）A、腺病毒載體構建：

本系統(tǒng)是以Ad5血清型E1/E3缺陷型腺病毒DNA為骨架，在克隆、包裝、擴增等各部條件做了改進和優(yōu)化，達到了克隆陽性率更高、質量更可靠、包裝穩(wěn)定、出毒迅速、滴度高等效果。在此基礎上，還拓展了更廣泛的應用，可以提供各種帶報告基因的，帶不同標簽的腺病毒構建和包裝服務。所包裝的腺病毒已成功應用于信號轉導，基因轉位，Co-IP，動物實驗，干細胞研究等科研實驗。并且可以完成較高難度的克隆構建，包括具有細胞毒性作用基因的腺病毒構建，在短時間內完成從原始質粒到病毒DNA的構建工作。 

• 克隆目的基因到穿梭載體（中介載體）及鑒定

根據客戶提供的原始質粒信息確定克隆方案：

• 如果原始質粒與本系統(tǒng)所用穿梭載體有匹配酶切位點，采用相應的內切酶切下相應片斷，回收并連接到穿梭載體。酶切，測序鑒定；

• 如果原始質粒與本系統(tǒng)所用穿梭載體沒有匹配酶切位點，設計帶有特殊接頭的引物進行PCR擴增，得到目的片斷，采用相應的內切酶切下相應片斷，回收并連接到穿梭載體。酶切，測序鑒定；

• 對于不適用于以上方案或者有特定要求的樣品，與客戶協(xié)商定制具體實施方案

2）克隆目的基因到腺病毒載體pAdPL及鑒定

利用重組技術將目的片段的表達框從穿梭載體轉移到腺病毒載體。

酶切鑒定陽性克隆，將陽性克隆測序二次鑒定。

B、慢病毒載體構建

慢病毒（Lent virus）載體是以HIV-1（人類免疫缺陷I型病毒）為基礎發(fā)展起來的基因治療載體，該載體可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上，達到持久性表達的效果。可有效地感染神經元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、內皮細胞、干細胞等多種類型的細胞，效果非常理想，因此具有廣闊的應用前景。

（二）病毒包裝、擴增：

• 將鑒定正確的基因克隆到慢病毒載體，與輔助載體一起轉染293T細胞進行包裝；

• 將包裝好的病毒超速離心收集；

• 將濃縮病毒進行滴定，滴定結果單位為PFU/ml（一般為5×108 PFU/ml以上，體積為500μl以上，根據客戶需要，不同量有價格差異），慢病毒包裝4500.00/ml過表達，2500.00/ml干擾

二、質量控制與鑒定：

• 測序鑒定

• 根據特定引物作RT-PCR鑒定

• 蛋白表達鑒定（根據客戶要求并由客戶提供高特異性抗體）