從活細(xì)胞中區(qū)分和排除死細(xì)胞可以更清晰地分離和鑒定細(xì)胞群。 Cell Meter 可固定活性染料是一大類細(xì)胞不可滲透的熒光活性染料，經(jīng)過優(yōu)化以匹配普通流式細(xì)胞儀的主要激發(fā)激光，例如 350、405、488、633 和 647 nm。這些染料不能滲透活細(xì)胞，但可以滲透膜受損的細(xì)胞。它們不可逆地與含胺和硫醇的蛋白質(zhì)和其他細(xì)胞成分發(fā)生反應(yīng)。由于膜受損的死細(xì)胞或固定細(xì)胞更容易與 Cell Meter VX450固定化細(xì)胞活性染料發(fā)生反應(yīng)，因此比膜完整的活細(xì)胞染色更亮，因此這些染料可用于評(píng)估哺乳動(dòng)物細(xì)胞的活細(xì)胞和死細(xì)胞狀態(tài)。Cell Meter VX450固定化細(xì)胞活性染料經(jīng)過優(yōu)化，可在 405 nm 的紫色激光下激發(fā)，發(fā)射波長(zhǎng)為 525/40 nm。與其他商業(yè)上類似的活力染料相比，這種可固定的活力染料更加穩(wěn)定。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的Cell Meter RX450 可固定活性染料。
適用儀器
| 流式細(xì)胞儀 | |
| Ex: | 405 nm 激發(fā) |
| Em: | 525/40 nm濾波片 |
| 通道: | AmCyan 通道 |
| 熒光顯微鏡 | |
| Ex: | Violet 濾波片組 |
| Em: | Violet 濾波片組 |
| 推薦孔板: | 黑色透明底板 |
樣品實(shí)驗(yàn)方案
簡(jiǎn)要概述
在 HHBS 中制備樣品（0.5 mL/測(cè)定）
將 Cell Meter RX450 添加到細(xì)胞懸液中
在室溫下對(duì)細(xì)胞染色 20 - 60 分鐘
清洗細(xì)胞
修復(fù)細(xì)胞（可選）
使用 525/40 nm 濾光片（AmCyan 通道）和/或使用 Violet 濾光片組的熒光顯微鏡通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)樣品
溶液制備
1.儲(chǔ)備溶液
所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下，避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1.1Cell Meter RX450 儲(chǔ)備液 (500X)
將 200 µL DMSO 添加到 Cell Meter RX450 小瓶中，制成 500X 儲(chǔ)備液。
注意：未使用的 Cell Meter RX450 儲(chǔ)備液應(yīng)分成一次性使用的等分試樣并儲(chǔ)存在 -20 °C 下。避免反復(fù)冷凍/解凍循環(huán)。
樣品操作及分析
1.根據(jù)需要處理細(xì)胞。
2.用 HHBS 或您選擇的不含疊氮化物和血清/蛋白質(zhì)的緩沖液清洗細(xì)胞一次。
3.在 HHBS 或您選擇的不含疊氮化物和血清/蛋白質(zhì)的緩沖液中，以 5 - 10 × 10 6/mL 重懸細(xì)胞。
4.將 1 µL 500X Cell Meter™ RX450 儲(chǔ)備液添加到 0.5 mL 細(xì)胞/檢測(cè)中并充分混合。
5.在室溫、5% CO2 培養(yǎng)箱中孵育 20 - 60 分鐘，避光。 注意染色濃度和孵育時(shí)間應(yīng)針對(duì)不同的細(xì)胞系通過實(shí)驗(yàn)確定。
6.洗滌細(xì)胞兩次并用 HHBS 或您選擇的緩沖液重懸細(xì)胞。
7.根據(jù)需要修復(fù)細(xì)胞（可選）。
8.使用 525/40 nm 濾光片（AmCyan 通道）和/或使用 Violet 濾光片組的熒光顯微鏡分析細(xì)胞。
