一、方法原理簡(jiǎn)介
標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)：國(guó)家《中華人民共和國(guó)生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB 5749-2006）中增加了賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲的微生物指標(biāo)，要求為<1個(gè)/10L。該產(chǎn)品運(yùn)用的檢測(cè)方法是國(guó)標(biāo)規(guī)定的“兩蟲”IFA 檢測(cè)方法，采樣淘洗及 IMS 系統(tǒng)均符合國(guó)標(biāo)及美國(guó) EPA1623 的標(biāo)準(zhǔn)方法。
具體步驟如下：過濾采樣→淘洗濃縮→ IMS 磁分離→ IFA 染色→顯微鏡檢
二、主要特點(diǎn)及技術(shù)*性說明
（一）、兩蟲系統(tǒng)設(shè)計(jì)的標(biāo)準(zhǔn)性、合理性、適用性
1、 美國(guó)UniBest公司Compact 型兩蟲檢測(cè)儀 IFA 染色系統(tǒng)符合并優(yōu)于中國(guó)國(guó)標(biāo)。
2、 美國(guó)UniBest公司Compact 型兩蟲檢測(cè)儀 IMS 免疫磁分離系統(tǒng)采用國(guó)標(biāo) GB/T 5750.12-2006 方法。
3、 美國(guó)UniBest公司Compact 型兩蟲檢測(cè)儀過濾系統(tǒng)采用符合國(guó)際技術(shù)規(guī)范規(guī)定的一次性濾囊。
（二）、兩蟲系統(tǒng)的可靠性、穩(wěn)定性
1、 過濾步驟回收率 ≥99%
2、 淘洗步驟回收率 ≥80%
3、 IMS 免疫磁分離步驟回收率 ≥90%
4、 總回收率（過濾、淘洗、磁珠分離、染色）≥ 35%
5、 檢測(cè)結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差 ≤10%
6、 鏡檢率：賈第鞭毛蟲孢囊 99%檢出，隱孢子蟲卵囊 99%檢出
7、 檢測(cè)可處理高濁度水樣：可達(dá) 100（NTU）
8、 試劑盒配備預(yù)制的陽性對(duì)照玻片，確保試劑盒的有效活性；避免誤檢，確保檢測(cè)的準(zhǔn)確性。
9、 保質(zhì)期長(zhǎng)：美國(guó) UniBest 優(yōu)佰達(dá)公司 ClearScan 系列兩蟲 IFA 染色試劑保質(zhì)期長(zhǎng)達(dá) 24 個(gè)月，是業(yè)內(nèi)保質(zhì)期更長(zhǎng)、性能更穩(wěn)定的 IFA 試劑。
（三）、兩蟲系統(tǒng)的*性、準(zhǔn)確性、經(jīng)濟(jì)性
1、 標(biāo)記單克隆抗體：包括抗隱孢子蟲抗體和抗賈第鞭毛蟲單克隆抗體的異硫氰酸熒光素（FITC），系一種的免疫球蛋白M五聚體，由5 個(gè)FITC結(jié)合點(diǎn)位同時(shí)標(biāo)記一個(gè)抗體，具有顯著的明亮熒光效果，該抗體是國(guó)標(biāo)推薦的染色試劑。
2、 提供固色液：固色液使顯色更穩(wěn)定，幾天后仍不褪色鏡檢效果依然清晰。
3、 美國(guó) UniBest 優(yōu)佰達(dá)公司 ClearScan 系列 IFA 染色試劑已添加專用復(fù)染液，可使聚焦更準(zhǔn)確，計(jì)數(shù)更清晰準(zhǔn)確。
4、 提供陽性對(duì)照玻片：試劑盒（25 次測(cè)試量）中含一個(gè)預(yù)制的載玻片供時(shí)時(shí)自檢，使測(cè)試更便捷更省時(shí)。
5、 采樣過濾系統(tǒng)采用美國(guó) EPA1623 標(biāo)準(zhǔn)推薦的一次性濾囊，杜絕樣品交叉污染；可以在不更改所有實(shí)驗(yàn)儀器、試劑及器具的情況下替代其它品牌的一次性或多次使用的過濾器具。
6、 美國(guó) UniBest 公司 ClearScan 系列兩蟲檢測(cè)系統(tǒng)，日常檢測(cè)運(yùn)行成本與市場(chǎng)同類產(chǎn)品相比具有明顯優(yōu)勢(shì)。
三、系統(tǒng)概述
（一）、采樣淘洗濃縮系統(tǒng)
采用符合中國(guó)國(guó)標(biāo)及美國(guó) EPA 要求的囊式過濾器對(duì)水樣進(jìn)行過濾，將孢囊、卵囊及其他物質(zhì)收集在過濾器上，該過濾器可用于實(shí)驗(yàn)室及野外現(xiàn)場(chǎng)水樣過濾。濾囊利用兩蟲專用淘洗緩沖液將攔截在濾囊上的兩蟲振蕩洗脫下來，最后進(jìn)行離心收集。
（二）、免疫磁分離系統(tǒng)（IMS）
IMS 過程使用美國(guó) UniBest 優(yōu)佰達(dá)公司的 ClearScan 系列兩蟲專用免疫磁分離試劑盒，利用帶有特異性抗體的磁珠與樣品中的賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲特異性抗原相結(jié)合，在磁場(chǎng)中高效選擇性分離，該步驟可保證檢測(cè)的特異性。
（三）、IFA（間接免疫熒光）染色系統(tǒng)
使用美國(guó) UniBest 優(yōu)佰達(dá)公司的 Cellabs 型檢測(cè)賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲診斷專用試劑盒（內(nèi)含的免疫球蛋白 M 五聚體 FITC 單克隆抗體）對(duì)水樣中的兩蟲（抗原）進(jìn)行熒光標(biāo)記，同時(shí)利用細(xì)胞核染色劑 DAPI（4，6-二脒基-2-苯基吲哚）與細(xì)胞核中的雙鏈 DNA 結(jié)合發(fā)出熒光，排除假陽性反應(yīng)，從而提高鏡檢準(zhǔn)確性。
（四）、顯微鏡檢系統(tǒng)
使用兩蟲專用熒光顯微鏡對(duì)著色樣本進(jìn)行檢測(cè)，觀察樣本，對(duì)符合孢囊和卵囊大小、外形、熒光特性的被觀察物依據(jù)國(guó)標(biāo) GB/T 5750.12-2006 中賈第鞭毛蟲孢囊與隱孢子蟲卵囊的特征（見尾頁）進(jìn)行定性、定量分析。
四、技術(shù)參數(shù)
| 系統(tǒng) | 設(shè)備 | 主要性能技術(shù)標(biāo) | 設(shè)備的應(yīng)用和特點(diǎn) |
| 過濾采樣及淘洗濃縮系統(tǒng) | UniBest 公司囊式過濾器 | 1、 此方法比其他方法更快更簡(jiǎn)單，可以對(duì)多樣個(gè)樣品同時(shí)進(jìn)行處理； 2、 一次性的設(shè)計(jì)杜絕交叉污染，避免造成假陽性誤判 3、 囊式濾器采用特制的0.45μm孔徑的改良濾膜能99%截留兩蟲，排除了假陰性。 | 該方法符合中國(guó)國(guó)標(biāo) GB5750.12-2006 及美國(guó) EPA 兩蟲過濾采樣方法；專用于水源水與自來水的隱孢子蟲及賈第鞭毛蟲的濃縮與回收；使用簡(jiǎn)單，濾器無需安裝和清洗。 |
| UniBest 公司洗脫振蕩器 | 1、 電源：230V 50HZ 50W 2、 工作振幅：1.5mm 3、 速度范圍：0-1000 振幅/分鐘 4、 上限載重：3kg 5、 凈重：8kg | 該產(chǎn)品可同時(shí)洗脫 12 個(gè)樣品，有效地節(jié)省了大量的人力及樣品前處理時(shí)間。 | |
| 專用蠕動(dòng)泵 | 1、 適用電源：AC220V/50Hz 2、 消耗功率：<140W 3、 流量范圍：0.7-6000ml/min 4、 轉(zhuǎn)速 10-600rpm 5、 液晶顯示屏 6、 工作環(huán)境：環(huán)境溫度 0~40°C，相對(duì)濕度<80% | 專用蠕動(dòng)泵因水樣只接觸泵管，維護(hù)清洗簡(jiǎn)單?？蛇x雙通道，同時(shí)采樣兩個(gè)樣品。 | |
| 專用離心機(jī) | 1、 適配器：4x250ml 2、 上限轉(zhuǎn)速：5300rpm 3、 定時(shí)范圍：0-99min 4、 電源：AC220V 50Hz 20A 5、 相對(duì)大離心力：5000g（注：g 為重力加速度） 6、 噪聲（上限轉(zhuǎn)速）： ≤ 60Db(A) 7、 凈重：30kg | 的安全保護(hù)設(shè)計(jì)： 1、 超速停止、門蓋自鎖、誤操作保護(hù) 2、 緊急情況開門 3、 防爆門蓋 4、 蜂鳴器報(bào)警系統(tǒng) 5、 具有 10個(gè)程序升降速率曲線 |
五、備注
按照國(guó)標(biāo) GB 5750 12-2006《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》規(guī)定，“兩蟲”檢測(cè)系統(tǒng)大致分為以下五個(gè)步驟，分別是：過濾采樣→ 淘洗濃縮→ IMS 磁分離→ IFA 染色→ 顯微鏡檢，其中過濾采樣僅僅是“兩蟲”檢測(cè)環(huán)節(jié)中的一個(gè)非核心步驟，實(shí)驗(yàn)方法中所提到的過濾器的型號(hào)并不能斷章取義地代表兩蟲檢測(cè)的采樣方法實(shí)質(zhì)，更不能以偏概全地代表兩蟲檢測(cè)全過程的檢測(cè)方法；過濾采樣器只是收集樣品的工具，而并非兩蟲檢測(cè)的關(guān)鍵技術(shù)，并且隨著兩蟲采樣技術(shù)的進(jìn)步，只要使用的兩蟲采樣器達(dá)到樣本采集的目的即可；如果僅僅用一個(gè)過濾采樣器的型號(hào)來自稱是國(guó)標(biāo)甚至國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)方法，就會(huì)混淆了兩蟲檢測(cè)方法以及國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的本來實(shí)質(zhì)。
美國(guó) UniBest 優(yōu)佰達(dá)集團(tuán)的“兩蟲”檢測(cè)系統(tǒng)，采用的是一次性濾囊的過濾采樣方法，且性能指標(biāo)不僅滿足而且優(yōu)于國(guó)標(biāo)（國(guó)標(biāo)要求濾囊的孔徑為 1μm，我們的孔徑為0.45μm，更小的孔徑，更, 能, , , 保證兩蟲的 99%截留, ）。
“兩蟲”檢測(cè)的核心步驟在于 IFA（間接免疫熒光）染色，美國(guó) UniBest 優(yōu)佰達(dá)集團(tuán)“兩蟲”染色試劑是國(guó)標(biāo)核心步驟的染色試劑。
