產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：
產(chǎn)品英文名稱EdU Cell Proliferation Image Kit (Orange Fluorescence)
產(chǎn)品中文名稱EdU法細(xì)胞增殖成像分析試劑盒（橙色熒光）
規(guī)格：100T/500T
貨號：EY-01X8522
用途：僅供科研研究實驗
特點&優(yōu)勢:
•提供優(yōu)化的陰性對照品，排除假陽性。
• 無須抗體。
• 無變性步驟，保持細(xì)胞形態(tài)和DNA完整性。
• 簡單，可靠，省事的創(chuàng)新方法。
• 的AbFluor 545 azide (Ex/Em = 546/565 nm)具有良好的光穩(wěn)定性與抗淬滅性。
• 針對熒光顯微鏡進(jìn)行優(yōu)化。
保存建議請參閱說明書中各個組件的存儲條件，自發(fā)貨之日起，按照推薦的保存條件，有效期為12個月。
運輸條件藍(lán)冰運輸
本產(chǎn)品具有下列特點:
1. 本試劑盒是單溶液式細(xì)胞增殖與細(xì)胞毒性檢測試劑,主要成分包含MTS和一個電子耦合試劑,溶液的穩(wěn)定性強,反應(yīng)的靈敏度高。
2. 操作簡便、快捷?？芍苯蛹尤氲綑z測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細(xì)胞,免去溶解步驟。
3. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。
4. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機溶劑來溶解甲臜產(chǎn)物。
5. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進(jìn)一步生成。
公司正在出售的產(chǎn)品：
| ANG-1 豬血管生成素1ELISA試劑盒 | 細(xì)胞組織總RNA提取試劑 |
| VCAM-1 豬血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1ELISA試劑盒 | DNA/RNA/miRNA分離提取試劑盒 |
| VEGF 豬血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子ELISA試劑盒 | RNA/mircoRNA/DNA/蛋白分提試劑盒 |
| VE-cad 豬血管內(nèi)皮鈣粘著蛋白復(fù)合體ELISA試劑盒 | 石蠟包埋組織miRNA提取試劑盒 |
| ACE2 豬血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2ELISA試劑盒 | 植物miRNA提取試劑盒 |
| ACE 豬血管緊張素轉(zhuǎn)化酶ELISA試劑盒 | 組織細(xì)胞miRNA提取試劑盒 |
| ANG-Ⅱ 豬血管緊張素ⅡELISA試劑盒 | 血液miRNA提取試劑盒 |
| VIP 豬血管活性腸肽ELISA試劑盒 | 血清miRNA提取試劑盒 |
| IgG4 豬旋毛蟲IgG抗體ELISA試劑盒 | 血漿miRNA提取試劑盒 |
| Thymosin β4 豬4ELISA試劑盒 | RNA樣本保存液 |
| FABP3/FABP11/MDGI 豬心型脂肪酸結(jié)合蛋白ELISA試劑盒 | 新型植物RNA提取試劑盒(含DNase I) |
| ANP 豬心鈉肽ELISA試劑盒 | 組織細(xì)胞RNA提取試劑盒(Trizol提取法) |
| c豬心肌特異性肌鈣蛋白TELISA試劑盒 | 酵母RNA提取試劑盒(堿法) |
| cTn-Ⅰ 豬心肌肌鈣蛋白ⅠELISA試劑盒 | 革蘭陰性菌裂解緩沖液 |
| SCD 豬酰去飽和酶ELISA試劑盒 | 革蘭陽性菌裂解緩沖液 |
| PAI-1 豬纖溶酶原激活物抑制因子1ELISA試劑盒 | DNaseⅠ溶液(1mg/ml) |
| PAI 豬纖溶酶原激活物抑制因子ELISA試劑盒 | DNaseⅠ(RNase free) |
| COX 豬化酶ELISA試劑盒 | RNA極速提取試劑盒(5分鐘) |
| CCR 豬原酶ELISA試劑盒 | 液體樣本TRIzol試劑 |
| ICAM-3/CD50 豬細(xì)胞間粘附分子3ELISA試劑盒 | 血清/血漿microRNA提取試劑盒 |
| ICAM-2 豬細(xì)胞間粘附分子2ELISA試劑盒 | 全血microRNA提取試劑盒 |
| PE 豬戊糖素ELISA試劑盒 | EdU法細(xì)胞增殖成像分析試劑盒（橙色熒光）組織/細(xì)胞microRNA提取試劑盒 |
| 豬瘟抗體 豬瘟抗體ELISA試劑盒 | 非凍型拭子DNA保存液 |
| IgM 豬瘟抗體ELISA試劑盒 | 柱式病毒RNA提取試劑盒2.0 |
操作步驟：
(一)獲得目的基因
1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。
2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。
(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體
1、載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點)進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。
2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。
(三) 獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種
1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。
2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。
3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。
(四)誘導(dǎo)表達(dá)
1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。
2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。
3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。
4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。
5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。
