產品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：
產品英文名稱：Caspase-9 Assay Kit (Colorimetric)
產品中文名稱：Caspase-9 活性分析試劑盒（比色法）
規(guī)格：20T/50T/100T
貨號：EY-01X8540
用途：僅供科研研究實驗
特點&優(yōu)勢:
• 簡單，優(yōu)化的實驗方法。
• 操作方便快捷。
• 檢測早/中期的細胞凋亡。
保存建議:請參閱說明書中各個組件的存儲條件，自發(fā)貨之日起，按照推薦的保存條件，有效期為12個月。
運輸條件:藍冰運輸
背景
Caspase全稱為含半的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase)。caspase是一類蛋白酶家族，成員較多，在人類，已經鑒定了11種不同的caspase，根據(jù)其蛋白酶序列的同源性可分為3個亞族：Caspase-1亞族包括 Caspase-1、4、5、11；Caspase-2亞族包括Caspase-2、9； Caspase-3亞族包括Caspase-3、6、7、8、10。起細胞凋亡執(zhí)行者作用的是caspase3,6,7。
本產品具有下列特點:
1.操作簡便、快捷?？芍苯蛹尤氲綑z測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟。
2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。
3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機溶劑來溶解甲臜產物。
4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進一步生成。
公司正在出售的產品：
A Beta1-40 (H-3-me6;H-3-me13;H-3-me14; Beta-Amyloid 1-40 0.1mgA Beta1-40 (H-3-me6;H-3-me13;H-3-me14; Beta-Amyloid 1-40) β淀粉樣肽1-40(結構改造)
ECE1 Protein Human 重組人 ECE1 蛋白
PLA2G2E重組小鼠 PLA2G2E 蛋白 Protein
EDAR Protein Rat 重組大鼠 EDAR 蛋白 (Fc 標簽)
HMGN3重組人 HMGN3 蛋白 Protein
小鼠抗促甲狀腺素受體抗體(Ab)ELISA 試劑盒 96T/48T
Rat ai smooth muscle aibody (ASMA) ELISA Kit 大鼠抗平滑肌抗體(ASMA)檢測試劑盒
HumanCailageglycoprotein39,HCgp-39ELISAKit 人軟骨糖蛋白39(HCgp-39)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumanangiotensionⅡreceptor1Aibody,ATⅡR1Ab檢測試劑盒人血管緊張素Ⅱ受體1抗體(ATⅡR1)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T
植物谷氨酰半胱合成酶(glamylsysteinesyhetase)活性比色法定量檢測試劑盒20次
Humanβ-glucuronidase，βGDELISAKit人β葡萄糖酸苷酶(βGD)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠高密度脂蛋白（HDL）檢測試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)檢測試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠肝脂酶(HL)檢測試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠肝病毒抗體（HV-Ab）檢測試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠α-輔肌動蛋白1(ACTN-1)檢測試劑盒 ，英文名： ACTN-1 ELISA Kit
Mouse monocyte chemotactic protein 1 (MCP-1/CCL2/MCAF) ELISA Kit 小鼠單核細胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)檢測試劑盒
ELISA 小鼠0脂酶A2(mouse sPLA2) 進口分裝
CLIAKitforIGFBP-6(MouseInsulin-likegrowthfactorbindingprotein6)ELISAkit小鼠胰島素樣生長因子結合蛋白6
通用型牛弓形體剛地弓形蟲病(Toxotest;Toxoplasmagondii)試劑盒20次
ELISAKitTAFI大鼠纖溶抑制因子
Caspase-9 活性分析試劑盒（比色法）LYVE1重組小鼠 LYVE1 / LYVE-1 蛋白 (Fc 標簽) Protein
低密度脂蛋白受體(LDLR)重組蛋白 Recombinant Low Density Lipoprotein Receptor (LDLR)
EEF1B2重組人 EF1B / EEF1B2 蛋白 Protein
ECE1 Protein Human 重組人 ECE1 蛋白
TNFRSF10D Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 TRAIL R4 / CD264 / TNFRSF10D 蛋白 (Fc 標簽)
操作步驟：
(一)獲得目的基因
1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。
2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉錄形成cDNA第一鏈,以逆轉錄產物為模板進行PCR循環(huán)獲得產物。
(二)構建重組表達載體
1、載體酶切:將表達質粒用限制性內切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。
2、PCR產物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。
(三) 獲得含重組表達質粒的表達菌種
1、 將連接產物轉化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標志(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質粒,雙酶切初步鑒定。
2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作。否則應篩選更多克隆,重復亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。
3、 以此重組質粒DNA轉化表達宿主菌的感受態(tài)細胞。
(四)誘導表達
1、挑取含重組質粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。
2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。
3、取部分液體作為未誘導的對照組,余下的加入IPTG誘導劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。
4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。
5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。
