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產品名稱 | 組織來源 | 肺靜脈組織 | |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 包裝 | T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | GOY-01X0697 | 細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 |
人肺大靜脈平滑肌分離自肺大靜脈組織；肺大靜脈在用肺呼吸的脊椎動物中，把動脈血由肺送回心臟的靜脈，是一個靜脈里流動脈血的血管。左右1對，共4條，兩條連接右肺，兩條連接左肺。肺靜脈異位引流是指肺靜脈未能直接與左心房連接，而與右心房或體靜脈系統(tǒng)連接的先天性心血管異位。肺靜脈淤血性肺動脈高壓，是由于肺靜脈內血液淤滯而引起的肺動脈高壓。正常情況下，肺循環(huán)具有血壓低、阻力小和順應性大的特點，肺動脈壓力高低取決于單位時間內肺動脈血流量和肺血管的阻力，要維持肺循環(huán)的低壓、低阻的狀態(tài)，必須保證整個肺循環(huán)系統(tǒng)的暢通無阻，血液順利地由肺動脈經毛細血管進入肺靜脈，再入左心室，經過左心室收縮進入體循環(huán)，才能避免肺動脈內壓力升高。肺大靜脈平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。該細胞參與血管壁炎癥反應，保持靜脈管腔的通暢，還是多數(shù)動脈疾病的靶細胞。
方法簡介：
公司實驗室分離的人肺大靜脈平滑肌采用yi蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：
公司實驗室分離的人肺大靜脈平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內狀態(tài)
消化液 0.25%yi蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
準備工作
1. 實驗器材準備：準備無菌的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶、移液管、離心管、手術器械等，并進行高壓滅菌或其他合適的消毒處理。
2. 試劑準備：配制或購買合適的培養(yǎng)基、消化酶（如、膠原酶等）、胎牛血清、雙抗等試劑，確保其無菌且在有效期內。
3. 實驗動物或組織來源準備：根據(jù)實驗需求，選擇合適的動物并進行相應的麻醉或處死，獲取所需組織；或從已有的組織樣本庫中獲取組織。
取材與處理
1. 取材：在無菌條件下，迅速取出目標組織，盡量減少對組織的損傷，并去除多余的脂肪、結締組織等非目的組織。
2. 清洗：將取出的組織用預冷的無菌PBS沖洗數(shù)次，以去除血液和雜質。
3. 剪切：將組織剪成約1 - 2mm3的小塊，以便后續(xù)消化。
細胞分離
1. 消化：將剪碎的組織塊放入含有適量消化酶的離心管中，在37℃恒溫搖床或培養(yǎng)箱中消化一段時間。期間可輕輕搖晃離心管，使消化更均勻。
2. 終止消化：當組織塊大部分被消化成單細胞懸液或小細胞團時，加入含血清的培養(yǎng)基終止消化。
3. 過濾與離心：用細胞篩過濾細胞懸液，去除未消化的組織碎片，然后將濾液以適當?shù)霓D速離心，收集細胞沉淀。
細胞觀察與檢測
1. 日常觀察：每天用倒置顯微鏡觀察細胞的形態(tài)、生長狀態(tài)、密度等，記錄細胞的變化情況，如發(fā)現(xiàn)細胞污染或異常，及時采取相應措施。
2. 細胞計數(shù)與活力檢測：在需要時，可采用臺盼藍染色等方法對細胞進行計數(shù)和活力檢測，以了解細胞的生長情況和健康狀態(tài)。
兔肝臟間質細胞（永生化） | 鴨胚胎成纖維細胞（永生化） |
小鼠腎小球系膜細胞（永生化） | 麗春紅S |
小鼠脂肪干細胞（永生化） | 虎紅(玫瑰紅)(孟加拉)染料 |
豬子宮內膜上皮細胞（永生化 | 麥芽浸膏 |
小鼠胚胎成纖維細胞 | 刃天青 |
小鼠結腸癌帶熒光 | 腺苷-5'-二磷酸葡糖二鈉（ADPG） |
大鼠神經膠質瘤細胞 | 植物木栓化細胞壁染色液(蘇丹法) |
1640(含NaHCO3 1.5g/L)培養(yǎng)基 | 乙酰胺瓊脂 |
人膀胱癌細胞 | Nile Red 尼羅紅 |
人骨肉瘤細胞 | 10000×SolarGreen 核酸染料 |
急性髓系細胞白血病細胞 | 氨基黑10B |
豬扁桃體上皮細胞（永生化） | 甲基紅 |
豬（萊蕪）腹部脂肪干細胞（永生化） | 人肺大靜脈平滑肌細胞次甲基綠 |
豬（杜洛克）腹部脂肪干細胞（永生化） | 甲基橙 |
膠原酶Ⅰ Gibco | 甲基綠 |
一、取材與分離
1. 快速操作
- 組織取材后需立即處理，避免長時間暴露于室溫或非營養(yǎng)環(huán)境。
- 使用無菌 PBS 或生理鹽水沖洗組織，去除血液、雜質。
2. 消化酶選擇
- 根據(jù)組織類型選擇消化酶，避免過度消化導致細胞損傷。
- 消化時間需嚴格控制（通常 10-30 分鐘），可通過顯微鏡觀察細胞解離狀態(tài)。
二、培養(yǎng)條件優(yōu)化
1. 培養(yǎng)基選擇
- 使用含血清或特定生長因子的培養(yǎng)基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細胞需添加胰島素、EGF 等。
- 避免頻繁更換培養(yǎng)基品牌或批次，減少細胞適應壓力。
2. 貼壁與傳代
- 原代細胞貼壁能力較弱，可能需要包被培養(yǎng)皿（如膠原蛋白、多聚賴氨酸）。
- 傳代時密度建議控制在 70%-80%，過度匯合會導致接觸抑制和分化。
三、污染控制
1. 無菌操作
- 全程在超凈臺操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。
- 培養(yǎng)基中可添加雙抗，但長期使用可能影響細胞活性。
2. 支原體檢測
- 定期檢測支原體污染（如 PCR 法），污染后需及時丟棄細胞。
四、狀態(tài)監(jiān)控
1. 日常觀察
- 每天檢查細胞形態(tài)、密度及培養(yǎng)基顏色，及時更換培養(yǎng)基（通常每 2-3 天換液一次）。
- 異常形態(tài)（如細胞變圓、碎片增多）可能提示污染或營養(yǎng)不足。
2. 傳代與凍存
- 原代細胞分裂次數(shù)有限（一般 5-10 代），需及時凍存早期代次細胞。
- 凍存液建議使用 DMSO+血清（或專用凍存培養(yǎng)基），梯度降溫后液氮保存。
