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上海哈靈生物科技有限公司
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單胺氧化酶試劑盒說明書
2024-11-1 閱讀(98)
一、測定意義：
單胺氧化酶(MAO，EC1.4.3.4)是一種廣泛存在于脊椎動物器官中的酶，尤其是在分泌腺、腦和肝臟中含量較高。它也在無脊椎動物和某些植物中發(fā)現(xiàn)，盡管含量較低。MAO在催化單胺類物質(zhì)代謝中發(fā)揮著關(guān)鍵的生理作用，其活性水平可以作為肝纖維化程度的一個指標(biāo)。此外，MAO活性的異常可能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的代謝紊亂，從而引發(fā)多種疾病。
二、測定原理：
MAO催化反應(yīng)產(chǎn)生過氧化氫(H2O2)，而過氧化物酶在氧氣存在的情況下能夠催化H2O2分解產(chǎn)生的氧，進(jìn)而氧化鄰聯(lián)茴香胺形成有色物質(zhì)。這種顏色的深淺與單胺氧化酶的活性呈線性關(guān)系，因此可以通過顏色的變化來定量分析MAO的活性。
三、實驗用品及儀器：
天平
低溫離心機
可見分光光度計/酶標(biāo)儀
微量石英比色皿/96孔板
蒸餾水
四、試劑組成和配制：
提取液一：液體，100mL/瓶，需4℃保存。
提取液二：液體，100mL/瓶，需4℃保存。
試劑一：液體，20mL/瓶，需4℃保存。
試劑二：液體，4mL/瓶，需4℃保存。
試劑三：液體，1mL/支，需4℃保存。
五、粗酶液提取步驟：
樣品處理：
稱取約0.1g樣品，加入1mL預(yù)冷的提取液一，充分冰浴勻漿。
1000g，4℃，離心10分鐘，棄去沉淀。
將上清液轉(zhuǎn)移到另一預(yù)冷的離心管中，10000g，4℃，離心30分鐘，棄去上清液。
加入1mL預(yù)冷的提取液二，震蕩混勻。
16000g，4℃，離心40分鐘，棄去上清液。
沉淀物中加入預(yù)冷的1mL生理鹽水或PBS，震蕩混勻，得到粗酶液(可用于可溶性蛋白濃度測定)。
細(xì)菌、真菌處理：
按照細(xì)胞數(shù)量(104個)：提取液體積(mL)為500~1000：1的比例(建議500萬個細(xì)胞加入1mL提取液)，冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3分鐘)。
10000g，4℃，離心10分鐘，棄去沉淀。
將上清液轉(zhuǎn)移到另一預(yù)冷的離心管中，10000g，4℃，離心30分鐘，棄去上清液。
加入1.0mL預(yù)冷的提取液二，震蕩混勻。
16000g，4℃，離心40分鐘，棄去上清液。
沉淀物中加入預(yù)冷的1.0mL生理鹽水或PBS，震蕩混勻，得到粗酶液(可用于可溶性蛋白濃度測定)，取上清液置于冰上待測。
血清處理：
直接進(jìn)行MAO活性測定。
以上是MAO活性測定實驗的指導(dǎo)，希望對您的實驗有所幫助。請確保在實驗過程中嚴(yán)格遵守安全操作規(guī)程，并在專業(yè)指導(dǎo)下進(jìn)行。
