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elisa實驗優(yōu)化包被的三大條件

2013-9-4  閱讀(12426)

一、如何挑選包被抗原

 

    包被抗原可分為天然蛋白,重組蛋白和小分子抗原三類。天然蛋白通過直接吸附凈化包裝要求,許多雜質(zhì)抗原的間接方法可以捕獲數(shù)據(jù)包(*和靶抗原反應(yīng)物質(zhì)如直接吸附在酶標(biāo)板,然后通過抗原抗體的固相的特異性反應(yīng))。重組蛋白的純化通??梢灾苯油?。小分子抗原如肽和一些小分子有機(jī)化合物,分子量太小,很難直接吸附在酶標(biāo)板,通常*和不相關(guān)的蛋白質(zhì)如牛血清白蛋白,耦合,耦合的固相載體上的吸附。

 

二、如何挑選包被液

 

    一般是一個ph9.6碳酸鹽緩沖液,如果包被抗原在堿性條件下不穩(wěn)定,也可以用pH7.2磷酸鹽緩沖溶液。

 

三、如何選擇包被溫度

 

    通常在4-8度為2小時通宵或37度的條件下,我們強(qiáng)烈建議4-8溫度范圍,有利于保持蛋白的活性。選擇4層濃度包被固相載體和涂層性能改變物質(zhì)的*濃度,總蛋白涂層濃度1-5ug/ml,應(yīng)該明確的涂層的*濃度的特異性抗原的實驗測定。

 

包被后是否需要封閉?封閉體系又應(yīng)該怎么選?

 

    封閉是否必要,取決于酶聯(lián)免疫吸附模型和具體實驗條件。一般來說,雙抗體夾心法,只要酶標(biāo)記物是高活性的,操作清洗*,無閉也可以得到滿意的結(jié)果。測定及間接的方法,一般的封閉是*的。常見的密封膠0.05% - 0.5%牛血清白蛋白,10%胎牛血清,明膠1%,脫脂奶粉5%,abmart建議使用5%脫脂奶粉,廉價和密封能力,但脫脂奶粉5%只適合短期使用,不要保存,因此使用較少的試劑盒。



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