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高靈敏ELISA試劑盒操作步驟中的忌諱

2018-1-26  閱讀(908)

ELISA試劑盒實驗中每一個步驟都尤為重要,細節(jié)不容忽視,它是實驗成功的關(guān)鍵與否;在這

里本司為方便各位了解,更好的完成實驗,特對高靈敏ELISA試劑盒操作步驟中的忌諱做出以

下分析,供大家參考:

1、吸取液體時速度不易太快,以免產(chǎn)生氣泡,吸取的量不夠準(zhǔn)確。

2、手工洗板時每次加入洗滌液后。應(yīng)靜置15~30s,不要將一個酶標(biāo)孑L中的洗滌液濺入另一

酶標(biāo)孔中,防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標(biāo)板放在毛巾或吸水紙上拍干。

3、底物為TMB,避免與皮膚相接觸。終止液為2tool的濃硫酸具有腐蝕性,應(yīng)盡量避免接觸皮

膚。

4、加樣后及時放人孵箱,標(biāo)本較多時,要分批操作。按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間,防止孵育

時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。

5、作時必須戴手套,穿工作衣,嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度。

6、剩余樣品及廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘,或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分

鐘后廢棄。

7、同批號試劑組分不得混用。

8、洗滌時各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。

9、每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔,該孔不加任何試劑,只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。

測量時先用此孔調(diào)OD值至零。

10、要確保微量加樣器的準(zhǔn)確性,可以使用蒸餾水和電子天平進行確定(由于蒸餾水不含雜質(zhì)

,溫度環(huán)境為20%左右時,lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作是0.2g)每一把微量加樣

器都應(yīng)該將其zui高量程和zui低量程進行確定。

11、在使用微量加樣器時,吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭,即使吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

12、檢驗技師應(yīng)具備從事實驗室操作的基本素質(zhì)和實踐經(jīng)驗。能熟練操作實驗儀器、器械,具

有一定總結(jié)和分析問題的能力,對實驗中出現(xiàn)的意外情況能及時妥善解決。

13、操作前仔細閱讀說明書,嚴(yán)格按照說明書要求進行規(guī)范化操作。不同批號的試劑不可混用

。值得改進的地方,反復(fù)試驗確定成立后才能改進,比如洗板次數(shù)的掌握等。

14、評估試劑的實用性,試劑的穩(wěn)定與否,對準(zhǔn)確率的高低到頭重要。在試劑啟用前,應(yīng)進行

陰、陽對照及樣品反復(fù)比照試驗,判定試劑符合要求后方可使用。

15、加樣要準(zhǔn)確、快速。加樣不準(zhǔn)確,酶生成物的量不能確定,直接影響顯色結(jié)果。另外,顯

色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān),所以加樣應(yīng)慎重。要求在一定時間內(nèi)加

樣完畢的實驗,如果加樣遲緩,便出現(xiàn)誤差,而且試劑長時間暴露在外,尤其室溫過高時,保

存期會縮短甚至失效。

16、使用校對過的微量移液器,排除自然誤差。移液器準(zhǔn)確與否對定量檢測尤為重要

17、嚴(yán)格掌握顯色時間,顯色時間過短,加入終止液反應(yīng)終止后,底物結(jié)合物的量過少,易出

現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時間后顯色,應(yīng)判為假陽性,這可能與試劑本身有關(guān)。加顯色劑后立

即顯色,不可報陽性,這可能是本底顯色的結(jié)果。

18、洗滌*,洗板不*,酶結(jié)合物本底顯色會呈現(xiàn)假陽性。另外,洗滌液要新鮮,現(xiàn)用現(xiàn)

配,陳舊的洗滌液會出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,也可能出現(xiàn)假陽性。

19、嚴(yán)控反應(yīng)時間,反應(yīng)時間過長,酶失活;反應(yīng)時間過短,酶結(jié)合物不能與血清中的微生物

抗原抗體充分結(jié)合,生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假陰性。

20、ELISA檢測操作步驟復(fù)雜,可強各環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制,才能得到準(zhǔn)確可靠的檢測結(jié)果。

愿以上這些能對您有所幫助,如果您還有什么疑問,我司咨詢。



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