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大鼠端粒酶ELISA試劑盒說明書報價

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大鼠端粒酶ELISA試劑盒說明書

大鼠端粒酶ELISA試劑

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍:                                                          96T

0pg/ml-160pg/ml

使用目的

本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中端粒酶含量

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本大鼠端粒酶水平。用純化的大鼠端粒酶抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入端粒酶,再與HRP標記的端粒酶抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的端粒酶呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品大鼠端粒酶濃度。 

試劑盒組成 

 

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1

7

終止液

6ml×1

2

酶標試劑

6ml×1

8

標準品(160pg/ml

0.5ml×1

3

標包被

12孔×8

9

標準品稀釋液

1.5ml×1

4

樣品稀釋液

6ml×1

10

說明書

1

5

顯色劑A

6ml×1

11

封板膜

2張  

6

顯色劑B

6ml×1/

12

密封袋

1

 

標本要求 

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但避免反復凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

3. 血清:

室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

4. 血漿:

應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

5. 尿液:

用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

6. 細胞培養(yǎng)上清:

檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。

7. 培養(yǎng)細胞

     檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBSPH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

8. 組織標本

切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?/font>2-8℃的溫度。加入一定量的PBSPH7.4),或組織蛋白萃取試劑用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

自備材料

1  蒸餾水。

2  加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

3  振蕩器及磁力攪拌器等

操作步驟

1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2. 

 

80pg/ml

5號標準品

150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

4opg/ml

4號標準品

150μl5號標準品加入150μl標準品稀釋液

20pg/ml

3號標準品

150μl4號標準品加入150μl標準品稀釋液

10pg/ml

2號標準品

150μl3號標準品加入150μl標準品稀釋液

5pg/ml

1號標準品

150μl2號標準品加入150μl標準品稀釋液

 

3. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

4. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

5. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

6. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

7. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 

8. 溫育:操作同3。

9. 洗滌:操作同5

10. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

11. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

12. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值) 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

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