人溶酶體相關(guān)膜蛋白2（HLAMP-2）ELISA檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品英文名稱(chēng)：Human human lysosomal-associated membrane protein 2,HLAMP-2 ELISA kit
規(guī)格：48T/96T
檢測(cè)方法：雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）
標(biāo)本：血清，血漿，細(xì)胞上清液，組織等
試劑盒說(shuō)明書(shū)：請(qǐng)來(lái)電或者郵件索取
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人溶酶體相關(guān)膜蛋白2（HLAMP-2）ELISA檢測(cè)試劑盒
實(shí)驗(yàn)材料與試劑配制：
1. 儀器與材料：酶標(biāo)儀（使用前預(yù)熱30分鐘，微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水，濾紙。
2. 洗液的配制：按 1:100的比例配制洗液備用。 樣品收集、處理及保存
1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：適用于檢測(cè)體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無(wú)菌管收集上清液，以1000×g離心15
分鐘，收集上清。
2. 細(xì)胞：用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞 3次，調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到10^4-10^6/ml左右，通過(guò)反復(fù)凍融，
使細(xì)胞破壞，并放出細(xì)胞內(nèi)成份?；蛘呒?xì)胞超聲粉碎，離心取上清液檢測(cè)。
3. 血清： 在室溫 下， 血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清待測(cè)。
4. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置 10 -20 分鐘后，
以1000×g離心15分鐘，收集上清。
5. 體液：包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集 ，以 1000×g
離心、15 分鐘 ，收集上清。
6. 組織標(biāo)本：切取 組織標(biāo)本，稱(chēng)取重量0.5mg加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，超聲破碎儀，
將標(biāo)本勻漿，以2000 -300rmp離心 20 分鐘 ，收集上清進(jìn)行檢測(cè) 。
7. 樣品 中不能含有 NaN3，因 NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（ HRP）活性。
8. 保存 ：如果樣品不能立即檢測(cè)，應(yīng)將其分裝，-80 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。保存過(guò)程中如出現(xiàn)
沉淀，應(yīng)再次離心。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高脂。如果血清中含大量顆粒，檢測(cè)前先離心
或過(guò)濾。不要在 37 ℃或更高的溫度加熱解 或更高的溫度加熱解 或更高的溫度加熱解或更高的溫度
加熱解或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解并確保樣品均勻地充分解凍。
人溶酶體相關(guān)膜蛋白2（HLAMP-2）ELISA檢測(cè)試劑盒
操作步驟 ：
1. 取出 試劑盒，室溫（ 20 -25 ℃）放置 30 分鐘。
2. 分組： 取出 96 孔板 根據(jù)待測(cè)樣品數(shù) 量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需板條，把剩余的板條繼續(xù)
冷藏處理，分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組（6個(gè)濃度）、空白 孔、待測(cè)樣品組。
注：為減少實(shí)驗(yàn)誤差，保證準(zhǔn)確性，建議設(shè)置復(fù)孔。
3. 加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入100ul 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中；空白對(duì)照孔加入100ul的
蒸餾水；其余微孔中加入100ul的待測(cè)樣本。
4. 加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組、待測(cè)樣本組各孔中加入50ul 的酶標(biāo)溶液 （空白對(duì)照孔除外）。
5. 溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后，放入濕盒內(nèi)于 37 ℃恒溫孵育恒溫孵育 1小時(shí)。
6. 洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置15 -30s 30s，充分清洗酶標(biāo)板5次，用吸水紙*拍干。
7. 顯色：各孔加入顯色劑A液 50ul 后，再加入顯色劑 B液 50ul 。
8. 終止： 25 -37 ℃下避光反應(yīng)10 -15分鐘， 加入 50 ul 終止液。
9. 讀板：在 450nm波長(zhǎng)讀取各孔的O 值。注： 讀板時(shí)必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，
讀板時(shí)間控制在終止反應(yīng)后的30 分鐘內(nèi)，以免影響準(zhǔn)確性。
人溶酶體相關(guān)膜蛋白2（HLAMP-2）ELISA檢測(cè)試劑盒
數(shù)據(jù)計(jì)算
1. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：各標(biāo)準(zhǔn)品 OD 值減去底色即堅(jiān)強(qiáng)空白孔OD 值（數(shù)據(jù)處理如下），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
1.1軟件處理：建議用戶使logit-log模式或四參數(shù)據(jù)處理模式（ y=（a-d）/（1+（x/c）^b）+d ）
1.2計(jì)算器或手工作圖處理：Logit-log 計(jì)算：以6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品OD 值的 Logit為縱坐標(biāo) y，以標(biāo)準(zhǔn)品的
濃度的 log值為橫坐標(biāo)X，繪制曲線圖。logit值計(jì)算公式如下:logit=ln（B/ B0）（1－B/ B0）手工
作圖：以標(biāo)準(zhǔn)濃度取log值為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的logit值為縱坐標(biāo)，在普通坐標(biāo)紙上或以標(biāo)準(zhǔn)濃度為
橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的 B/B0B為縱坐標(biāo)在 logit-log坐標(biāo)紙上畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線（理想化時(shí)是一條直）。
2. 根據(jù)待測(cè)樣品的B/B0可以從坐標(biāo)紙上查出樣品的濃度值。注意：如果使用普通坐標(biāo)紙，查出的
數(shù)值應(yīng)取反對(duì)數(shù)才是zui后濃度值。
3.敏感度：1.0µmol/L
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