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免疫熒光顯微技術
免疫熒顯微技術的基本原理是:使熒光抗體與標本切片中組織或細胞表面的抗原進行反應,洗滌除去游離的熒光抗體后,于熒光顯微鏡下觀察,在黑暗背景上可見明亮的特異熒光。
標本的制作 羊抗豬IgG-RBITC
熒光顯微技術主要靠觀察切片標本上熒光抗體的染色結果作為抗原的鑒定和定位。因此標本制作的好壞直接影響到檢測的結果。在制作標本過程中應力求保持抗原的完整性,并在染色、洗滌和封埋過程中不發(fā)生溶解和變性,也不擴散至臨近細胞或組織間隙中去。標本切片要求盡量薄些,以利抗原抗體接觸和鏡檢。標本中干擾抗原抗體反應的物質要充分洗去,有傳染性的標本要注意安全。
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Rabbit human IgM Whole serum 兔抗人IgM抗血清1ml免疫熒光法還是檢測自身抗體的好工具,在自身免疫病的實驗診斷中應用廣泛。其突出優(yōu)點是能以簡單方法同時檢測抗體和與抗體起特異反應的組織成分,并能在同一組織中同時檢查抗不同組織成分的抗體。主要有抗核抗體、抗平滑肌抗體和抗線粒體抗體等??购丝贵w的檢測zui常采用鼠肝作核抗原,可做成冰凍切片、印片或勻漿。用組織培養(yǎng)細胞如Hep-2細胞或Hela細胞涂片還可檢出抗著絲點抗體、抗中性粒細胞漿抗體等。應用免疫熒光技術可以檢出的其他自身抗體有抗(胃)壁細胞抗體、抗雙鏈DNA抗體、抗甲狀腺球蛋白抗體、抗甲狀腺微粒體抗體、抗骨髓肌抗體及抗腎上腺抗體等。
熒光抗體技術的一種特殊應用是流式細胞分析(flowcytometry)。在這種分析方法中檢測儀器不是熒光顯微鏡,檢測對象不是固定了的標本,而是將游離細胞作熒光抗體特異染色后,在特殊設計的儀器中通過噴嘴逐個流出,經單色激光照射發(fā)出的熒光信號由熒光檢測計檢測,并自動處理各處數據 。這種方法可用于檢測細胞大小、折散率、粘滯度等,更常用于T細胞亞群等的檢測。