CBRH-7919肝癌細(xì)胞上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級(jí)胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級(jí)胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)CBRH-7919肝癌細(xì)胞:
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測(cè)即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測(cè)。
(7)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
(R)-1-phenylethanethiol (R)-1-甲基芐硫酚 33877-16-6
TERT-BUTYL 2-AMINO-2-METHYLPROPYLCARBAMATE 95034-05-2
(2-AMinoethyl)-6-benzyloxyindole 31677-74-4
(2R,3S,5S)-3-(Benzyloxy)-5-[2-[[(4-Methoxyphenyl)diphenylMethyl]aMino]-6-(benzyloxy)-9H-purin-9-yl]-2-(benzyloxyMethyl)cyclopentanone (interMediate step 5) (2R,3S,5S)-3-芐氧基-5-[2-[[(4-甲氧基苯基)二苯基甲基]氨基]-6-芐氧基-9H-嘌呤-9-基]-2-芐氧基甲基環(huán)戊酮 142217-79-6
(2R,3S,5S)-3-(Benzyloxy)-5-[2-[[(4-Methoxyphenyl)diphenylMethyl]aMino]-6-(phenylMethoxy)-9H-purin-9-yl]-2-(benzyloxyMethyl)cyclopentanol (interMediate step 4) (2R,3S,5S)-3-芐氧基-5-[2-[[(4-甲氧基苯基)二苯基甲基]氨基]-6-芐氧基-9H-嘌呤-9-基]-2-芐氧基甲基環(huán)戊醇 142217-78-5
(2R,4S)-3-TERT-BUTYL 4-METHYL 2-TERT-BUTYLOXAZOLIDINE-3,4-DICARBOXYLATE 145625-08-7
(2R,4S)-4-Hydroxypyrrolidine-1,2-dicarboxylic acid 1-tert-butyl ester 2-Methyl ester (N-Boc-trans-4-Hydroxy-D-proline Methyl ester N-BOC-反式-4-羥基-D-*甲酯 135042-17-0
(2R,4S)-N-[1-[3,5-Bis(trifluoroMethyl)benzoyl]-2-(4-chlorobenzyl)piperidin-4-yl]quinoline-4-carboxaMide (2R,4S)-N-[1-[3,5-雙(三氟甲基)苯甲酰]-2-(4-氯芐基)哌啶-4-基]喹啉-4-甲酰胺 177707-12-9
(2R,4S)-N-Boc-4-hydroxypiperidine-2-carboxylic acid Methyl ester (2R,4S)-N-BOC-4-羥基哌啶-2-甲酸甲酯 321744-26-7
(2R,5R)-(+)-2-TERT-BUTYL-3-METHYL-5-BENZYL-4-IMIDAZOLIDINONE (2R,5R)-(+)- 2-叔丁基-3-甲基-5 芐基-4-咪唑啉酮 390766-89-9
HINESOL 茅蒼術(shù)醇 23811-08-7
(2R,6R)-2,6-diMethylMorpholine 2R,6R-二甲基嗎啉 171753-74-5
(2S)-2-(1-Methylethyl)oxirane (S)-異丙基環(huán)氧乙烷 55123-01-8
LisdexaMfetaMine DiMesylate 賴(lài)氨酸安非他命*馬利蘭 608137-33-3
(S)-N-FMOC-2-(4'-PENTENYL) ALANINE (2R)-2-N-芴甲氧羰基氨基-2-甲基-6-庚烯酸 288617-73-2
(2S)-2-[[(9H-Fluoren-9-ylMethoxy)carbonyl]aMino]-2-Methyl-9-decenoic acid (2S)-2-N-芴甲氧羰基氨基-2-甲基-9-癸烯酸 288617-75-4
RalfinaMide (S)-2-[[4-[(2-氟芐基)氧基]芐基]氨基]丙酰胺 133865-88-0
3-(DiMethylaMino)-L-alanine 3-(N,N-二甲基氨基)-L-* 10138-99-5
(2S)-2-aMino-6-[[(2S)-4-aMino-2-hydroxybutyl]aMino]hexanoic acid 34994-11-1
(2S)-2-aMino-6-[8-[[(4S)-4-aMino-4-carboxy-butyl]aMino]-2,7,9-triazabicyclo[4.3.0]nona-3,5,7,9-tetraen-2-yl]hexanoic acid 124505-87-9
(2S)-2-AMino-8-nonenoic acid (2S)-2-氨基-8-壬烯酸 924307-76-6
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來(lái),移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過(guò)夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過(guò)1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過(guò)夜。第二天放入液氮中。
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