S-180腹水瘤細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體S-180腹水瘤細胞):
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
Clover extract 紅車軸草提取物 85085-25-2
PyriMidine-2-boronic acid 嘧啶-2-硼酸 851199-85-4
PYGEUM AFRICANUM EXTRACT 郁李皮提取物 85865-74-3
2-(2-OXO-1-IMIDAZOLIDINYL)ETHYL METHACRYLATE 2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-氧代-1-咪唑啉基)乙基酯 86261-90-7
Carbazole 咔唑 86-74-8
CARUMONAM 噻肟單酰胺菌素 87638-04-8
500Mg,1g 21618-67-7
6-ROX, SE 6-羧基-X-羅丹明琥珀酰亞胺酯 216699-36-4
Ixabepilone BMS-247550 伊沙匹隆 219989-84-1
2-tert-Butyl-6-methylphenol 2-叔丁基-6-甲基* 2219-82-1
Cinacalcet 甲狀旁腺激素 226256-56-0
6-broMo-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline 6-溴-1,2,3,4-四氫異喹啉 226942-29-6
Dehydroandrosterone 脫氫雄甾酮 2283-82-1
D-Allaric acid, O-5'-deoxyadenosin-5'-yl-(5'→4)-O-α-D-glucopyranosyl-(1→2)-, 4-(dihydrogen phosphate) 23526-02-5
N-(3-aMinopropyl)-N-dodecylpropane-1,3-diaMine 月桂胺二亞丙基二胺 2372-82-9
METHYLIDYNETRI-P-PHENYLENE TRIISOCYANATE 1,1’,1"-次甲基三(4-異氰酸)苯 2422-91-5
11-AMinoundecanoic 11-氨基十一酸 2432-99-7
TAK-242 瑞沙托維 243984-11-4
L-Methionine methyl ester hydrochloride L-蛋氨酸甲酯鹽酸鹽 2491-18-1
2,2,6,6-TetraMethylpiperidinooxy 2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物 2564-83-2
TERIZIDONE 特立齊酮 25683-71-0
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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