SAC-IIB2腹水瘤細胞 上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)SAC-IIB2腹水瘤細胞 :
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min 。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
Dehydroepiandrosterone 去氫表雄酮 53-43-0
8-AZIDOADENOSINE 5'-TRIPHOSPHATE, SODIUM SALT 8-疊氮酰苷-5'-三磷酸鈉 53696-59-6
3-aMinophenyl)phosphonic acid (3-氨基苯基)膦酸 5427-30-5
7-OCTEN-2-OL, 2-METHYL-6-METHYLENE 月桂烯醇 543-39-5
HISPIDIN 6-[(1E)-2-(3,4-二羥基苯基)乙烯基]-4-羥基-2H-吡喃-2-酮 555-55-5
Permethric acid 菊酸 55701-05-8
英文名稱 中文名稱 CAS號
NA
HydrobroMic Acid 氫溴酸 10035-10-6
Benzeneacetic acid, a-hydroxy-4-nitro- (R)-4-硝基扁桃酸 10098-39-2
Microcystin-LR 微囊藻毒素(LR亞型) 101043-37-2
100g 地克珠利 101831-37-2
(R)-4-Benzyl-2-oxazolidinone (R)-4-芐基-2-噁唑烷酮 102029-44-7
Methoxyacetaldehyde 甲氧基乙醛 10312-83-1
(4-anilinoazo)benzene- 4'-sulfonic acid 對氨基偶氮苯基-4-磺酸 104-23-4
HYDROXYPROPYL CHITOSAN 羥丙基脫乙酰殼多糖 104673-29-2
Ethyl cyanoacetate 氰乙酸乙酯 105-56-6
4-Hydrazinyl-2(1H)-pyridinone 106689-41-2
Propargyl alcohol 107-19-7
Adipaldehyde 己二醛 1072-21-5
2-methylpentane 2-甲基戊烷 107-83-5
Di-tert-butyl peroxide 二叔丁基過氧化物 110-05-4
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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