HeLa [ Chang Liver ]張氏肝細(xì)胞上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級(jí)胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級(jí)胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)HeLa [ Chang Liver ]張氏肝細(xì)胞:
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。HeLa [ Chang Liver ]張氏肝細(xì)胞加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測(cè)即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測(cè)。
(7)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
triMethyl(1-sulfanylethyl)azaniuM 625-00-3
Thiocolchicoside 硫秋水仙苷 602-41-5
Teflubenzuron 氟苯脲 83121-18-0
Tegafur * 17902-23-7
TERT-BUTYL 4-CYANO-3-FLUOROBENZYLCARBAMATE 229623-55-6
TERT-BUTYL 5-(4,4,5,5-TETRAMETHYL-1,3,2-DIOXABOROLAN-2-YL)-3,6-DIHYDROPYRIDINE-1(2H)-CARBOXYLATE 1-叔丁氧羰基-3,6-二氫-2H-吡啶-5-硼酸頻哪醇酯 885693-20-9
Spinosyn D 催殺 131929-63-0
styrenated phenol 苯乙烯化* 61788-44-1
SUBERIC ACID MONOMETHYL ESTER 辛二酸單甲酯 3946-32-5
SUBEROSIN SUBEROSIN 581-31-7
Suberylglycine 60317-54-6
succinic seMialdehyde 琥珀半醛 692-29-5
Succinic acid 丁二酸 110-15-6
SucciniMidyl-6-(broMoacetaMido)caproate 109880-16-2
Sucrose stearate 蔗糖硬脂酸酯 25168-73-4
SugaMMadex SodiuM 343306-71-8
Sulfalen 磺胺林 152-47-6
sulfaMethoxazole hydroxylaMine 114438-33-4
SulfaMethoxine * 651-06-9
SulfaMic acid [(1S,2S,4R)-4-[4-[[(1S)-2,3-dihydro-1H-inden-1-yl]aMino]-7H-pyrrolo[2,3-d]pyriMidin-7-yl]-2-hydroxycyclopentyl]Methyl ester hydrochloride 1160295-21-5
Sulfaquinoxaline SodiuM 磺胺喹啉鈉 967-80-6
Sulfathiourea 磺胺硫脲 515-49-1
Sulfisoxazole Acetyl 磺胺乙酰異噁 80-74-0
Sulfonic acids,C10-18-alkanesulfonic, sodiuM salts C14-17 仲烷基磺酸鈉 68037-49-0
SULFORHODAMINE 101 ACID CHLORIDE 磺基羅丹明101磺酰氯 82354-19-6
SULFOTEP 治螟磷 3689-24-5
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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