FRhK-4恒河猴胚腎細(xì)胞上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級(jí)胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級(jí)胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)FRhK-4恒河猴胚腎細(xì)胞 :
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測(cè)即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測(cè)。
(7)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
Tween 80 吐溫 80 9005-65-6
POLYSTYRENE-B-POLYBUTADIENE-B-POLYSTYRENE 聚苯乙烯丁二烯共聚物 9003-55-8
Polyuréthane 909-54-5
Polyvinyl chloride 聚氯乙烯 9002-86-2
PraMoxine hydrochloride 鹽酸普莫卡因 637-58-1
PraseodyMiuM oxide 氧化鐠 12037-29-5
REMODULIN 潑尼索酯 5626-34-6
Pregn-5-en-20-aMine,3-Methoxy-N,N-diMethyl-, (3b,20S)- (9CI) PACHYAXIMINE A 128255-08-3
Pregnenolone 孕烯醇酮 145-13-1
propanocaine 丙泮卡因 493-76-5
Propanoic acid, 3-[[(1,1-diMethylethoxy)carbonyl]aMino]-2-hydroxy- (9CI) 218916-64-4
Propanoic acid,3-(dodecylthio)-, 1,1'-[oxybis(2,1-ethanediyloxy-2,1-ethanediyl)] ester 苯乙烯基化-N-苯基苯胺 64253-30-1
Propanoic acid,3-chloro-2,2-diMethyl- 3-氯特戊酸 13511-38-1
Propanoicacid, 2-broMo-2-Methyl-, 3-(ethoxydiMethylsilyl)propyl ester 265119-86-6
VirginiaMycin 維吉尼霉素 11006-76-1
英文名稱 中文名稱 CAS號(hào)
PIBOSEROD,2H-(1,3)OXAZINO(3,2-A)INDOLE-10-CARBOXAMIDE, N-((1-BUTYL-4-PIPERIDINYL)METHYL)-3,4-DIHYDRO- PIBOSEROD 152811-62-6
PICEATANNOL 白皮杉醇 10083-24-6
PigMent Blue 17 顏料藍(lán)17 71799-04-7
PigMent Orange 5 顏料橙 5 3468-63-1
PigMent Red 53:1 顏料紅 53:1 5160/2/1
PigMent Yellow 155 顏料黃 155 68516-73-4
PigMent Yellow 184 四氧化釩鉍 14059-33-7
PigMent Yellow 191 顏料黃 191 129423-54-7
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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