KG-1白血病細(xì)上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)KG-1白血病細(xì) :
(1) 收集1×106個細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離KG-1白血病細(xì) 心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測。
(7)流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
Nitroethane 硝基乙烷 79-24-3
Nitroethylene 硝基乙烯 3638-64-0
NO2 過氧化氮 10102-44-0
Nitroguanidine purity: 98% Min 硝基胍 556-88-7
Nitrosobenzene 亞硝基苯 586-96-9
nitrosyl hydroxide 亞硝酸 7782-77-6
NK 1841 (dye) 2-[5-[1,1-二甲基-3-(4-磺酸基丁基)-1,3-二氫苯并[E]吲哚-2-亞基]-戊-1,3-二烯基]-1,1-二甲基-3-(4-磺酸基丁基)-1H-苯并[E]吲哚內(nèi)鹽鈉鹽 64285-36-5
NK 433 116287-13-9
N-Methyl-1,2-benzenediaMine dihydrochloride N-甲基鄰苯二胺鹽酸鹽 25148-68-9
N-Methyl-4-(tributylstannyl)iMidazole N -甲基- 4 -(三正丁基錫)咪唑 446285-73-0
N-Methylbenzohydrazide N-甲基苯甲酰肼 1483-24-5
N-Methylbenzohydrazide hydroChloride N-甲基苯甲酰肼鹽酸鹽 1660-25-9
N-MethylcyclopropanaMine N-甲基環(huán)丙胺 5163-20-2
N-Methyl-d3-glycine-2,2-d2HCl 1219794-62-3
UCARSOL NM-608(MethyldiethanolaMine) N-甲基二乙醇胺 105-59-9
N-Methyl-glucosaMine 42852-95-9
N-Methyl-L-alanine N-甲基-L-* 3913-67-5
N-Methyllindcarpine N-METHYLLINDCARPINE 14028-97-8
N-MethylnicotinaMide N-甲基* 114-33-0
N-Methyl-Pyrrolidinone N-甲基吡咯烷酮 872-50-4
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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