NK-92人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)NK-92人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞:
(1) 收集1×106個細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測。
(7)流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
Methyl glycinate 甘胺酸甲酯 616-34-2
Methyl hydrogen sulphate 75-93-4
L-STEPHOLIDINE 左旋千金藤啶堿 16562-13-3
L-threo-.alpha.-D-galacto-Octopyranoside 吡利霉素鹽酸鹽 78822-40-9
L-Threonic Acid 7306-96-9
L-Thyroxine L-甲狀腺素 51-48-9
L-Thyroxine,sodiuM salt 左旋甲狀腺素鈉 1955/3/8
L-TYROSINE (3,3-D2) 72963-27-0
L-TYROSINE-13C9 55443-60-2
MAGNESIUM FORMATE DIHYDRATE 甲酸鎂水合物 6150-82-9
MagnesiuM hydride 二氫化鎂 7693-27-8
MAGNESIUM MALEATE, DIHYDRATE 蘋果酸鎂 869-06-7
MagnesiuM Methoxide 甲醇鎂 109-88-6
MagnesiuM sulphide 硫化鎂 12032-36-9
MagnesiuM trisilicate 三(原)硅酸二鎂 14987-04-3
MagnesiuM,chloro(2,2-diMethylpropyl)-(9CI) 氯化新戊烷基鎂 13132-23-5
MAGNOFLORINE IODIDE, (+)-(RG) 碘化木蘭花堿 4277-43-4
MAITOTOXIN 魚尾素 59392-53-9
MaleiMidoacetic 馬來酰亞胺基乙酸琥珀酰亞胺酯 55750-61-3
MALONAMAMIDINE HYDROCHLORIDE 丙二酰脒鹽酸鹽 34570-17-7
propanedial 丙二醛 542-78-9
MALONIC ACID, [2-14C] 3715-08-0
Maltose 麥芽糖 69-79-4
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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