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MDA-MB-435S乳腺癌細胞

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所在地上海市

更新時間:2016-07-12 04:04:51瀏覽次數(shù):352次

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MDA-MB-435S乳腺癌細胞 上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)MDA-MB-435S乳腺癌細胞
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞 ,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。

其他*產(chǎn)品:
Glycochenodeoxycholic acid sodiuM salt 甘氨鵝脫氧膽酸鈉 16564-43-5
Glycofurol 三縮四乙二醇 31692-85-0
GLYCOLALDEHYDE DIETHYL ACETAL 2,2-二乙氧基乙醇 621-63-6
Glycolic acid 乙醇酸 79-14-1
Glycyl-L-glutaMine Monohydrate 甘氨酰-L-*一水合物 13115-71-4
Glycyrrhiza glabra 光果甘草(GLYCYRRHIZA GLABRA)根提取物 84775-66-6
Liquorice 甘草酸 1405-86-3
GLYPHOSATE 草甘膦 1071-83-6
GO 6976  136194-77-9
gold cyanide 氰化亞金 506-65-0
Gold shot (99.95%) 金 7440-57-5
Gold(I) trisodiuM disulphite 二亞硫酸金(I)三鈉 19153-98-1
Gonadorelin diacetate 醋酸* 71447-49-9
Goserelin Acetate 醋酸戈舍瑞林 145781-92-6
GOSSYPLURE  50933-33-0
Gossypol 棉籽酚 303-45-7
GraMicidin S 短* S 113-73-5
granaticin A  19879-06-2
Grape Seed Extract 葡萄籽提取物 84929-27-1
Graphite 石墨 7782-42-5
Grepafloxacin Hydrochloride 格帕沙星 119914-60-2
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則  慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。

SMC-1胸膜細胞瘤

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NCI-H446 H446小細胞肺癌細胞

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QGY-7701肝癌細胞

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