NCI-N87人胃癌細(xì)胞上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級(jí)胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級(jí)胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)NCI-N87人胃癌細(xì)胞:
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離 心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測(cè)即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測(cè)。
(7)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
Ethynylestradiol-3-sulfate 24560-70-1
ETHYNYLFERROCENE 二茂鐵乙炔 1271-47-2
LevetiracetaM RaceMic Mixture EtiracetaM 乙拉西坦 33996-58-6
ETORPHINE 乙烯啡 14521-96-1
EUK 207 EUK 207 478020-50-7
EUK-189 N,N'-雙(3-乙氧基亞水楊基)-1,2-乙二胺-錳(II) 186350-27-6
EUPERGIT(R) C SPHERES 聚丙烯酸載體C 93356-75-3
Evening PriMrose Oil * 90028-66-3
英文名稱 中文名稱 CAS號(hào)
dodecyl propionate 6221-93-8
dofequidar 1-[4-[2-羥基-3-(5-喹啉基氧基)丙基]-1-哌嗪基]-2,2-二苯基乙酮 129716-58-1
DOWEX(R) 504 HYDROGEN FORM 二乙烯基苯與磺化(苯乙烯和乙烯基乙苯)的聚合物 69011-20-7
Doxantrazole 3-(1H-四唑-5-基)-9H-噻噸-9-酮 10,10-二氧化物 51762-95-9
Doxorubicin Hydrochloride 鹽酸* 25316-40-9
DoxylaMine Succinate USP 琥珀酸多西拉敏 562-10-7
D-PenicillaMine D-* 52-67-5
viquidil 維喹地爾 84-55-9
D-RhaMnose D-鼠李糖 634-74-2
D-RIBOSE-5-PHOSPHATE DISODIUM SALT D-核糖-5-磷酸二鈉鹽 18265-46-8
DriselaseBasidioMycetes sp. 崩潰酶 85186-71-6
D-SACCHARIC ACID 1,4-LACTONE 糖質(zhì)酸-1,4-內(nèi)酯 389-36-6
d-StreptaMine, O-2-aMino-2,3-dideoxy-alpha-d-ribo-hexopyranosyl-(1->4)-O-[O-alpha-d-Mannopyranosyl-(1->4)-O-2,6-diaMino-2,6-dideoxy-beta-l-idopyranosyl-(1->3)-beta-d-ribofuranosyl-(1->5)]-2-deoxy-, sulfate (salt) 54911-32-9
D-TAGATOSE 塔格糖 87-81-0
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來(lái),移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過(guò)夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過(guò)1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過(guò)夜。第二天放入液氮中。
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