CAS:9015-85-4,T4 DNA連接酶,T4 DNA Ligase

英文名稱：T4 DNA Ligase
CAS號(hào)：9015-85-4

級(jí)別：BR
分子量：55.3kDa，單體
來(lái)源：含有T4噬菌體克隆基因30的大腸桿菌
濃度：1u/ul（200CEU/ul）
活性定義：是指在ATP-PPi交換反應(yīng)中，37℃、30分鐘內(nèi)將1nmol [32PPi]轉(zhuǎn)換為Norit可吸收形式所需的酶量（weiss單位，1個(gè)weiss單位相當(dāng)于約200個(gè)粘性末端連接單位。1個(gè)粘性末端連接單位：20ul反應(yīng)體系（50mM Tris-HCL（PH7.5）, 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 25ug/ml BSA, 12uM（300ug/ml）的5-DNA末端）中，在16℃、30分鐘內(nèi)連接50%連接HindIII酶切的Lambda DNA 產(chǎn)物所需的酶量）
酶活性分析混合物：66mM Tris-HCL（PH7.6）, 10mM DTT, 6.6mM MgCL2, 0.066mM ATP, 3.3uM[32PPi]
保存液組分：20mM Tris-HCL（PH7.5）, 50mM KC1, 1mM DTT，0.1mM EDTA和50%（v/v）
10×T4 DNA Ligase緩沖液（#B69）：400mM Tris-HCL, 100mM MgCL2, 100mM DTT, 5mM ATP（PH7.5,25℃）
50% PEG溶液：50%（w/v）聚乙二醇4000
抑制劑：當(dāng)反應(yīng)體系中NaC1或KC1的濃度超過200 mM時(shí)，可強(qiáng)烈抑制T4 DNA Ligase活性
失活：65℃加熱10分鐘或70℃加熱5分鐘
注意：聚乙二醇（PEG）可極大地增加平末端DNA的連接效率，PEG4000在反應(yīng)體系中的推薦濃度為5%（w/v）；T4 DNA Ligase與DNA結(jié)合會(huì)改變條帶的瓊脂糖凝膠電泳遷移率，為避免此現(xiàn)象，電泳前需處理樣本或分子量標(biāo)準(zhǔn)。樣本處理如下：樣本與Fermentas公司6×DNA Loading Dye&SDS溶液（#R1151）混合，75℃加熱5分鐘或65℃加熱10分鐘后冰浴保存；轉(zhuǎn)化時(shí)，連接產(chǎn)物的體積不得超過感受態(tài)細(xì)胞體積中的10%；電轉(zhuǎn)化之前，先用氯仿抽提方法除去連接混合物中的T4 DNA Ligase，然后經(jīng)乙醇沉淀純化抽提產(chǎn)物
質(zhì)量控制：測(cè)試表明無(wú)內(nèi)切脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。功能檢測(cè)：粘性末端或平末端DNA的連接能力
性狀：液體。該酶催化雙鏈DNA或RNA中毗鄰的5'磷酸基團(tuán)和3'-羥基末端之間形成磷酸二酯鍵，還可以修復(fù)雙鏈DNA、RNA或DNA/RNA復(fù)合體中的單鏈切口，連接DNA的粘性和平末端，但該酶對(duì)單鏈核酸無(wú)酶活性。該酶需要輔因子ATP
用途：生化研究。粘性末端或平末端雙鏈DNA的連接；雙鏈寡核苷酸接頭與雙鏈DNA連接；雙鏈DNA、RNA或DNA-RNA復(fù)合體中缺口的修復(fù)；連接酶介導(dǎo)的RNA檢測(cè)；位點(diǎn)特異性突變；擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性
保存： -20°C

CAS:9015-85-4,T4 DNA連接酶,T4 DNA Ligase

GRP2125,M-H平板,BR9CM
GRP1117,羥基磷灰石,250g
鷹嘴豆芽素A,標(biāo)準(zhǔn)品,Abiochanin A,≥98%,
P0038,特級(jí)胎牛血清/Fetal bovine serum（Defined FBS） ,BR,100毫升,保存：-20℃
GRP1723,腦浸液（豬）,用于配制培養(yǎng)較難生長(zhǎng)的微生物培養(yǎng),BR
GRP1790,葡萄糖磷酸鹽蛋白胨水（VP-MR試驗(yàn)用）,供VPMR試驗(yàn)用（GB標(biāo)準(zhǔn)）,250g
CAS:129572-48-1,5-溴-4氯-3-吲哚N-乙酰-β-D-氨基半乳糖苷/5-溴-4-氯-3-吲哚基-N-乙酰-β-D-氨基半乳糖苷/X-GalNAc,超純,98%,25毫克,保存：-20℃
CAS:1087-21-4,間苯二甲酸二烯丙酯/間酞酸二烯丙酯/1,2-苯二甲酸二-2-丙烯酯/間苯二甲酸二丙烯酯/異苯二甲酸二烯丙酯/間苯二甲酸丙烯酯/Dially isophthalate,AR,98%,25毫升,RT
苯磺酸*,標(biāo)準(zhǔn)品,含量測(cè)定,100mg,常溫,避光
CAS:10117-38-1,無(wú)水亞硫酸鉀/亞硫酸鉀/Potassium sulfite,CP,95%,500克,RT
L-*,標(biāo)準(zhǔn)品,含量測(cè)定,100mg,常溫,避光
*,標(biāo)準(zhǔn)品,含量測(cè)定,100mg,常溫,避光
GRP1690,亞硝酸鹽（產(chǎn)氣）,15支
CAS:519-62-0,葉綠素B/葉綠素鎂/Chlorophyll B,BR,90%,1毫克,避光,-20℃