人胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子（TARC/CCL17）使用說明書

實(shí)驗(yàn)原理：
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子（TARC/CCL17）水
平。用純化的人胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子（TARC/CCL17）抗體包被微孔板，制成固相抗體，
往包被單抗的微孔中依次加入胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子（TARC/CCL17），再與HRP 標(biāo)記的胸
腺活化調(diào)節(jié)趨化因子（TARC/CCL17）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹
底洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成
zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子（TARC/CCL17）呈正相關(guān)。用
酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人胸腺活化調(diào)節(jié)趨
化因子（TARC/CCL17）含量。

人胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子（TARC/CCL17）使用說明書

樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20 分鐘，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上
清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20 分鐘后，離心
20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次
離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程
中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/
2
分）。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞
濃度達(dá)到100 萬/ml 左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20 分
鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?br />用。標(biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器
將標(biāo)本勻漿充分。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待
檢測，其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上
進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

人胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子（TARC/CCL17）使用說明書