在大鼠胰淀素（Amylin）ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中我們需要注意一些實(shí)驗(yàn)誤差的問題，下面就是為實(shí)驗(yàn)減少誤差的具體操作步驟：
1．實(shí)驗(yàn)使用前，將所有試劑充分搖勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免在實(shí)驗(yàn)加樣時(shí)加入大量的氣泡，實(shí)驗(yàn)時(shí)在加樣上產(chǎn)生誤差。
2．根據(jù)待檢測(cè)樣品的數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需要使用的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品需根據(jù)自己的數(shù)量來定，如在實(shí)驗(yàn)中能使用復(fù)孔的則盡量做復(fù)孔。
3．將稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul加入反應(yīng)孔、并加入待測(cè)樣品50ul在反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的*標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩使其均勻，在37℃的條件下溫育1小時(shí)。
4．以上實(shí)驗(yàn)結(jié)束后即甩去孔內(nèi)的液體，每孔均加滿洗滌液，振蕩30秒后，甩去孔內(nèi)的洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)操作3次即可。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)則需增加一次。
5．在每孔中加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩使其搖勻，在37℃的條件下溫育30分鐘。
6．將孔內(nèi)的液體甩去，將每個(gè)孔中加滿洗滌液，振蕩30秒后，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7. 將每個(gè)孔中均加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩搖勻，在37℃的條件下溫育10分鐘。注意：避免光照。
8．在取出酶標(biāo)板時(shí)，即迅速加入50ul終止液，加入終止液后立即測(cè)定結(jié)果。
9．zui后即在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
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