現(xiàn)在由于ELISA試劑盒檢測(cè)的方便，許多尋常百信也會(huì)購買ELISA試劑盒來做實(shí)驗(yàn)，ELISA試劑盒的種類很多，有人elisa試劑盒、小鼠elisa試劑盒、大鼠elisa試劑盒等各種，不過在人們的心目中，目前還是進(jìn)口ELISA試劑盒比國產(chǎn)ELISA試劑盒要好。不管是進(jìn)口的還是國產(chǎn)的ELISA試劑盒，在實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，我們都不可忽視實(shí)驗(yàn)的背景影響，那么怎樣才能把試驗(yàn)背景影響降低到zui低呢？要從以下幾個(gè)方面入手：
1.洗滌：看似無聊的步驟，其實(shí)是實(shí)驗(yàn)的重中之重，因?yàn)槿绻唇Y(jié)合的材料殘留在微孔板中，那么它會(huì)增加背景噪音。如有必要，可增加洗滌液中的鹽濃度，這會(huì)阻止非特異結(jié)合反應(yīng)。如果背景過高，而您懷疑洗滌不夠時(shí)，可以嘗試增加洗滌次數(shù)。
2.密封：封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn)。這就降低了可產(chǎn)生信號(hào)的抗體非特異結(jié)合的機(jī)會(huì)。您當(dāng)然也希望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧。如果您的背景過高，懷疑封閉不充分，那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液，或適當(dāng)延長(zhǎng)封閉時(shí)間。
如果您一直被背景問題所困擾，那么也許您該花些時(shí)間來優(yōu)化封閉液。這可能需要時(shí)間，但也是值得的。目前主要有兩種類型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多個(gè)因素，包括微孔板的表面試劑、ELISA試劑盒吸附的抗原、您的抗體和檢測(cè)試劑。好的封閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合，但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測(cè)試劑發(fā)生相互作用。
3.抗體濃度： ELISA實(shí)驗(yàn)我們通常根據(jù)平常的操作步驟，ELISA試劑盒但是如果試劑稍有不同，則可能需要優(yōu)化抗體的量。記住，非特異的抗體結(jié)合會(huì)增加背景。為了防止這一點(diǎn)，切勿使用過多的一抗或二抗。
4.檢測(cè)試劑：切勿使用過多的檢測(cè)試劑。如果濃度過高，或者未正確稀釋，則會(huì)導(dǎo)致高背景。也不要顯色過度，如有必要，優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)加入終止液。
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