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Elisa試劑盒雙抗夾心法具體實驗步驟

閱讀：2100發(fā)布時間：2015-4-23

ELISA雙抗體夾心法的原理是將特異性抗體結(jié)合到固相載體上形成固相抗體，然后和待檢血清中的相應(yīng)抗原結(jié)合形成免疫復(fù)合物，洗滌后再加酶標(biāo)記抗體，與免疫復(fù)合物中抗原結(jié)合形成酶標(biāo)抗體-抗原-固相抗體復(fù)合物，加底物顯色，判斷抗原含量。下面我們就來看一下elisa試劑盒雙抗夾心法的具體實驗步驟：

首先*步是包被，用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過夜。第二天，丟棄孔中的溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次洗滌3分鐘。

第二步是加樣，加一定稀釋的待檢樣品0.1ml到已包被的反應(yīng)孔中，置于37℃ 的溫度下孵育1小時。孵育完之后洗滌。

洗滌完之后需要做的是加酶標(biāo)抗體在各個反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。

做完上個步驟，下面我們需要做的就是加底物液顯色，在各個反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

實驗即將完成即終止反應(yīng)，于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

實驗的zui后一步即實驗結(jié)果的判定，可在白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

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