ELISA試劑盒測定操作非常簡單，一般涉及到標本的收集保存、試劑準備、加樣、溫育、洗板、顯色、比色、結果判斷和結果報告及解釋等方面，ELISA試劑盒其中任一步驟的不當都會影響測定結果，且尤以加樣、溫育和洗板等步驟為甚。正確的加樣方法應為45度，吸頭貼著孔壁加入，應注意角度太小，會使液體殘留在孔壁上，導致加樣不準確；吸頭應當貼著管壁和液面的交界處！
目前臨床上使用血清標本測定的標志物一般有傳染原體的抗原和抗體、腫瘤標志物、激素、特種蛋白、細胞因子和治療藥物等。用于傳染原體的抗原和抗體、腫瘤標志物和特種蛋白等的檢測的血清標本的收集則沒有時間和體位方面的影響，用于ELISA試劑盒測定的臨床標本zui為常用的是血清（漿），有時由于特定的檢測目的，也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等標本。對用于激素和治療藥物測定的血清標本的收集，要留意收集時間甚或體位有可能會對測定結果產生影響。再如治療藥物的檢測，應根據(jù)藥代動力學選擇服藥后的zui適時間抽血檢測。又如當從臥位變?yōu)檎玖⑽粫r，血清中腎素活性將泛起顯著增高。如可的松在早晨4～6點之間，會有一峰值泛起：生長激素、促黃體激素（LH）和促卵泡激素（FSH）均以陣發(fā)性方式開釋，因此，在測定此類激素時，有必要在緊密親密相連的時間距離內采取數(shù)份血樣本，以其中間值為測定值。只是在處理和保存方面要考慮以下幾個方面：首先要注意避免出現(xiàn)嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團，其有類似過氧化物的活性，因此，在以HRP為標記酶的ELISA測定中，如血清標本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應顯色。血清標本如是以無菌操作分離，則可以在2～8 ℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存。ELISA試劑盒樣本的長時間保存，應在-70 ℃以下。樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染，一則細菌的生長，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產生分解作用；二則一些細菌的內源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應酶作標記的測定方法產生非特異性干擾。標本在保存中如出現(xiàn)細菌污染所致的混濁或絮狀物時，應離心沉淀后取上清檢測。冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融。標本的反復凍融所產生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產生破壞作用，從而引起假陰性結果。此外，凍融標本的混勻亦應注意，不要進行劇烈振蕩，反復顛倒混勻即可。
