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免疫組化染色

閱讀:434發(fā)布時(shí)間:2016-10-27

 

1. 石蠟切片,步驟同前。切片經(jīng)貼片后,60℃烤片30min使蠟熔化,經(jīng)二甲苯Ⅰ、Ⅱ各10min,脫蠟。然后,將切片放入100%、95%、90%、80%、70%乙醇中3-5min,再放入蒸餾水中3min,水化。

2.脫蠟和水化后,用PBS(pH7.4,具體看所用抗體及染色試劑說明)沖洗3次,每次3分鐘。洗瓶沖洗。

3. 根據(jù)抗體的要求,對(duì)組織抗原進(jìn)行相應(yīng)的修復(fù)。可選步驟,具體見抗體說明書。

4.每張切片加1滴或50μl 3%過氧化氫,室溫下孵育10分鐘,以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性。PBS沖洗3次,每次3分鐘。此步驟是對(duì)內(nèi)源性過氧化物酶含量高的組織而言。

4. 除去PBS液,每張切片加1滴或50μl的*抗體,室溫下孵育60分鐘或4℃過夜,具體參見每種抗體的說明書。PBS沖洗3次,每次3分鐘。

5. 除去PBS液,每張切片加1滴或50μl 即用型MaxVisionTM 試劑或SP試劑,室溫下孵育10-15分鐘。PBS沖洗3次,每次3分鐘。

6. 除去PBS液,每張切片加2滴或100μl新鮮配制的DAB或AEC溶液,顯微鏡下觀察3-5分鐘(DAB)或37℃環(huán)境下10-30分鐘(AEC)。

7. 自來水沖洗,蘇木素復(fù)染10分鐘,PBS或自來水沖洗返藍(lán)。如果用DAB顯色,則切片經(jīng)過梯度酒精脫水干燥,二甲苯透明,步驟同H-E染色,中性樹膠封固;如果用AEC顯色,則切片不能經(jīng)酒精脫水,而直接用水性封片劑封片。


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