異硫氰酸熒光素是一種熒光試劑，發(fā)射綠色熒光。該分子中含有活潑的異硫氰酸基團，易于與蛋白質(zhì)等分子反應，常用于蛋白質(zhì)的熒光標記等。 能與抗體結合的一種熒光指示劑。用于熒光顯微鏡觀察。
異硫氰酸熒光素純品為黃色或橙黃色結晶粉末，易溶于水和酒精溶劑。有兩種異構體，其中異構體Ⅰ型在效率、穩(wěn)定性與蛋白質(zhì)結合力等方面都更優(yōu)良。FITC分子量為389.4，zui大吸收光波長為490～495nm，zui大發(fā)射光波長為520～530nm，呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光。
異硫氰酸熒光素在冷暗干燥處可保存多年，是目前應用zui廣泛的熒光素。其主要優(yōu)點是人眼對黃綠色較為敏感，通常切片標本中的綠色熒光少于紅色。 FITC能和各種抗體蛋白結合，結合后的抗體不喪失與一定抗原結合的特異性，并在堿性溶液中具有強烈的黃綠色熒光。通過在熒光顯微鏡下觀察或流式細胞儀分析可對相應抗原進行定性、定位或定量的檢測。用于醫(yī)學，農(nóng)學和畜牧等方面，可對由地細菌病毒和寄生蟲等所致疾病進行快速診斷。
異硫氰酸熒光素標記抗體流程：
（1）將待交聯(lián)的蛋白（濃度≥1mg/ml）對交聯(lián)反應液透析三次4℃，至pH＝9.0。交聯(lián)反應液配制方法：7.56g NaHCO3，1.06g Na2CO3，7.36g NaCl，加水定容至1 L。
（2）將FITC溶于DMSO中，濃度為1mg/mL。每次交聯(lián)使用的FITC均應新鮮配制，避光。
（3）按P:F（蛋白質(zhì):FITC）=1mg:150μg 的比例將FITC緩慢加入于抗體溶液中，邊加邊輕輕晃動使其與抗體混合均勻，暗處4 ℃反應8 h。
（4）加入5mol/L的NH4Cl至終濃度50mmol/L， 4 ℃終止反應2 h。
（5）將交聯(lián)物在PBS中透析四次以上，至透析液清亮。
（6）交聯(lián)物的鑒定
蛋白濃度（mg/mL） = [ A280– 0.31×A495 ] / 1.4
F/P比例: 3.1×A495 / [A280 – 0.31×A495 ]，該值應介于2.5 ~ 6.5之間。
（7）FITC交聯(lián)的蛋白應置于pH 7.4的磷酸鹽緩沖液中，加入0.1% NaN3、1% BSA，4℃避光保存。
