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技術(shù)文章

凍存細胞復蘇的步驟和注意事項

閱讀:6136發(fā)布時間:2017-7-3

在實際操作中,凍存細胞要進行復蘇,再培養(yǎng)傳代。復蘇細胞一般采用快速融化法。以保證細胞外結(jié)晶快速融化,以避免慢速融化水分滲入細胞內(nèi),再次形成胞內(nèi)結(jié)晶損傷細胞。 

一、凍存細胞復蘇的操作步驟

(1)佩戴眼鏡和手套,從液氮罐中取出安瓿或冷凍管。

(2)迅速放入 38℃水浴中,并不時搖動,在 1 分鐘內(nèi)使其*融化,然后在無菌下取出細胞。

(3)在 1000r/min速度下離心 5~10 分鐘,棄去上層液,加入適量培養(yǎng)液后接種于培養(yǎng)瓶中,接種濃度 1×109/L,置 37℃溫箱靜置培養(yǎng),次日 更換一次培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng),觀察生長情況。若細胞密度較高,及時傳代?;驘o需離心直接將細胞加入瓶中,并加入培養(yǎng)基貼壁培養(yǎng) 12~24 小時 后,充去上清,換入新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

 二、凍存細胞復蘇的注意事項

1)從增殖期到形成致密的單層細胞以前的培養(yǎng)細胞都可以用于凍存,但為對數(shù)生長期細胞。在凍存前一天換一次培養(yǎng)液;

2)將凍存管放入液氮容器或從中取出時,要做好防護工作,以免凍傷;

3)凍存和復蘇用新配制的培養(yǎng)液。


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