血液中的淋巴細(xì)胞通過高內(nèi)皮靜脈（high endothelialvenules，HEVs）進入淋巴結(jié)中。這一過程首先是由一些地址素（addressin）的引導(dǎo)，其中包括a4b7的受體MadCAM-1以及CD62L的受體PNAd。在剛出生的小鼠中，MAdCAM-1的表達量較高，隨著時間的推移，大約兩周以后，PNAd的表達量占據(jù)主導(dǎo)地位。這一上調(diào)引導(dǎo)了基于L-選擇素（L-selectin）的成體淋巴細(xì)胞歸巢的效應(yīng)。有報道指出，一類表達趨化因子受體CCR7的樹突狀細(xì)胞（DC）能夠進入次級淋巴器官，進而促進高內(nèi)皮靜脈（HEV）的發(fā)育，但這類DC的活動是否受到腸道微生物的調(diào)節(jié)仍未可知ELISA試劑盒。
在SPF小鼠中，腸道相關(guān)淋巴結(jié)的發(fā)育受到一系列轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控，包括ID2, IRF8, Batf3, IRF4。同時也受到 Notch2-依賴型RALDH+&CD11b+CD103+DC的調(diào)控。這類DC十分特殊，有報道指出這類DC能夠?qū)⒊Ｒ?guī)CD4+T細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)檎T導(dǎo)型Treg細(xì)胞，以及誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞的歸巢行為。因此，這類細(xì)胞很可能受到腸道微生物的調(diào)節(jié)，進而影響淋巴結(jié)的發(fā)育。
對此，來自清華大學(xué)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)研究所的石彥教授課題組利用無菌培養(yǎng)小鼠模型與基因表達譜分析手段，證明了腸道微生物對RALDH+DC以及淋巴結(jié)發(fā)育的影響。相關(guān)結(jié)果發(fā)表在zui近一期的《Immunity》雜志上。
首先，為了證明無菌小鼠中外周淋巴結(jié)的發(fā)育缺陷現(xiàn)象是由淋巴細(xì)胞歸巢能力下降導(dǎo)致的，作者們利用CFSE標(biāo)記了一定量的淋巴結(jié)細(xì)胞并通過尾靜脈注射的方式分別導(dǎo)入SPF小鼠與GF（即無菌）小鼠體內(nèi)。實驗結(jié)束24小時之后，在SPF小鼠以及GF的腹股溝淋巴結(jié)，腸系膜淋巴結(jié)以及脾臟中都檢測到了CFSE陽性的細(xì)胞群體。但是，相比于脾臟，GF小鼠的腹股溝淋巴結(jié)以及腸系膜淋巴結(jié)中的CFSE陽性細(xì)胞數(shù)量明顯低于SPF小鼠。進一步的細(xì)胞特征分析也表明，CD4+T細(xì)胞，CD8+ T細(xì)胞，以及CD19+B細(xì)胞數(shù)量都明顯減少。同時，作者發(fā)現(xiàn)五周左右的GF小鼠腹股溝淋巴結(jié)HEV中MAdCAM-1的表達量仍未下調(diào)，而PNAd的表達量也未明顯上調(diào)，GF小鼠的淋巴結(jié)大小也明顯低于SPF小鼠。通過將SPF小鼠與GF小鼠進行一段時間的共室培養(yǎng)后，作者發(fā)現(xiàn)GF小鼠HEV中兩類地址素的表達量特征開始與SPF小鼠靠攏。這說明腸道微生物可能影響了HEV的生理特征。之后，作者將GF小鼠與SPF小鼠不同淋巴結(jié)的RNA提取出來并進行了深度測序。有意思的是，MAdCAM-1與PNAd-1的RNA表達水平并沒有明顯差異。這說明這一蛋白水平的差異可能是由于轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的變化導(dǎo)致的。有意思的是，SPF小鼠中與脂肪代謝以及*信號通路的相關(guān)基因表達量明顯高于GF小鼠ELISA試劑盒。
維他命A（VitA）富集于脂肪細(xì)胞中，它能夠激組織分化過程中的*（RA）信號。*脫氫酶（RALDH）能夠?qū)⒕S生素的衍生物-*，轉(zhuǎn)變?yōu)?。為了檢測SPF小鼠中RALDH的表達量，作者利用CD1特異性*-beta-乳酸脫氫酶報告基因小鼠，提取了體內(nèi)的腹股溝淋巴結(jié)細(xì)胞并進行了體外培養(yǎng)與孵育與檢測。結(jié)果顯示，在SPF小鼠的腸系膜淋巴結(jié)（MLN）中，有1%為RALDH+細(xì)胞，然而在GF小鼠中難以檢測到。相似結(jié)果也出現(xiàn)在PP，LP中。之后，作者將GF小鼠與SPF小鼠進行了共同孵育。結(jié)果顯示：共同孵育之后GF小鼠的淋巴結(jié)中RALDH+細(xì)胞的數(shù)量明顯上調(diào)。
由于之前一致認(rèn)為RALDH+細(xì)胞主要存在于大腸中，那么外周淋巴結(jié)中pLN的存在表明其可能具有此前未知的生理功能。為了證實這一猜想，作者提取了SPF小鼠體內(nèi)的RALDH+ 細(xì)胞并將其通過靜脈注射的方式導(dǎo)入五周左右的GF小鼠體內(nèi)。7天以后，再次將CFSE標(biāo)記的SPF LN細(xì)胞通過靜脈注射的方式導(dǎo)入小鼠體內(nèi)并觀察其歸巢能力。結(jié)果顯示：在RALDH+細(xì)胞導(dǎo)入的小鼠中，CFSE+細(xì)胞向mLN，iLN中歸巢的能力明顯高于對照組。這說明RALDH+細(xì)胞的確能夠影響淋巴細(xì)胞的歸巢行為。
之后，作者希望了解腸道微生物是如何影響RALDH+細(xì)胞的生理功能的。首先，作者對這部分RALDH+細(xì)胞進行了鑒定，證明它們的確屬于腸道分布的CD103+ CD11b+DC，進而表明腸道微生物的存在能夠引起這部分細(xì)胞從腸道向外周淋巴結(jié)遷移。之后，作者利用不同類型的抗生素進行處理，發(fā)現(xiàn)RALDH+DC的遷移受到一類叫做"熱帶假絲酵母"的腸道真菌的調(diào)控。
進一步，作者發(fā)現(xiàn)RALDH+向外周淋巴結(jié)的遷移能夠引起HEV地址素的表達譜的變化，即降低MAdCAM-1的表達量，同時升高PNAd的表達量。另外，作者發(fā)現(xiàn)這部分從腸道遷移過來的DC能夠在外周淋巴結(jié)中對淋巴細(xì)胞進行"教育"，從而引導(dǎo)它們成熟后向腸道組織遷移ELISA試劑盒。
