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利用CRISPR/CAS9對人類干細胞系進行可誘導(dǎo)基因敲除

閱讀:600發(fā)布時間:2017-11-28

    近日,科學(xué)家利用CRISPR/CAS9技術(shù)實現(xiàn)了對人類干細胞系進行可誘導(dǎo)基因敲除,這一方法的成功對于研究基因在干細胞及分化不同階段中的作用具有重要推動作用。

    對基因表達進行的時間調(diào)控對于闡明一個基因在生物學(xué)系統(tǒng)中的功能至關(guān)重要,但到目前為止,在人類多能干細胞中實現(xiàn)可誘導(dǎo)基因敲除,建立可誘導(dǎo)基因敲除的人類干細胞系仍存在很大挑戰(zhàn)。

    在該項研究中,研究人員結(jié)合CRISPR/CAS9介導(dǎo)的基因組編輯和Flp/FRT以及Cre/LoxP系統(tǒng)成功實現(xiàn)建立了可誘導(dǎo)基因敲除的人類多能干細胞系。研究人員發(fā)現(xiàn)dual-sgRNA的靶向作用對于將FRT序列進行的雙等位基因敲入非常重要。除此之外,他們還開發(fā)了出一種新的策略將一個可調(diào)控活性的重組酶表達體系同時導(dǎo)入細胞,移除了藥物抗性基因,利用這種方法可以加快iKO hPSC細胞系的獲得速度。

    研究人員通過這種兩步法敲除策略,對人類胚胎干細胞和誘導(dǎo)多能干細胞中的SOX2,PAX6,OTX2,AGO2等基因?qū)崿F(xiàn)了可誘導(dǎo)性基因敲除,建立了相關(guān)細胞系。


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