細(xì)胞凋亡過程中可觀察到系列形態(tài)學(xué)特征和生化特征。早期凋亡信號(hào)的效應(yīng)產(chǎn)生于胞內(nèi)，此時(shí)細(xì)胞膜保持完整。MERCK公司已發(fā)展出幾種方法以檢測(cè)凋亡細(xì)胞胞內(nèi)的多種效應(yīng)，包括：DNA段的檢測(cè)、膜對(duì)稱性的變化、caspases激活、以及細(xì)胞死亡相關(guān)蛋白水平的變化等。多數(shù)檢測(cè)使用的底物和Marker適用于絕大多數(shù)種類的哺乳動(dòng)物。
　　
　　凋亡細(xì)胞染色體DNA以核小體為單位的切割導(dǎo)致細(xì)胞不可逆死亡?？梢圆捎肗ucleosomeELISA，對(duì)產(chǎn)生的單體及寡聚核DNA段進(jìn)行定量。核小體的DNA成分被捕獲于酶標(biāo)板上，使用*標(biāo)記的抗組蛋白抗體檢測(cè)捕獲的核小體數(shù)量。組蛋白-DNA段的量反應(yīng)了一個(gè)特定樣品中死亡及瀕臨死亡的細(xì)胞的量。
　　
　　DNA段也可通過片段末端標(biāo)記進(jìn)行原位檢測(cè)，MERCK提供基于TUNEL方法的試劑盒。DNA段末端標(biāo)記可通過熒光染料或比色底物方法進(jìn)行檢測(cè)。另外，細(xì)胞形態(tài)的變化如胞膜皺摺或出泡、核染色質(zhì)致密、胞質(zhì)濃縮等，都可作為細(xì)胞凋亡的證據(jù)。采用熒光染料進(jìn)行末端標(biāo)記的可用流式細(xì)胞技術(shù)進(jìn)行定量，其光散射變化也可支持由單一參數(shù)得出的結(jié)論。DNA段可以從凋亡細(xì)胞中分離并使用瓊脂糖電泳進(jìn)行分析。約180bp的多倍寡核小體片段在電泳上呈典型的梯狀條帶，可進(jìn)一步證實(shí)凋亡的存在。若使用PelletPaintCo-Precipitant，只需室溫操作，兩分鐘即幫助DNA沉淀更快捷方便。
　　
　　線粒體膜電位和膜通透性的變化也是凋亡細(xì)胞一個(gè)重要特點(diǎn)。凋亡細(xì)胞另一個(gè)生化特征是細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰*從胞質(zhì)轉(zhuǎn)至胞外。膜聯(lián)蛋白中的AnnexinⅤ，是一種磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰*有強(qiáng)親和力。通過使用AnnexinⅤ-FITC(PF032)或AnnexinⅤ-BiotinApoptosisDetectionKit，及RAPIDTM方法進(jìn)行凋亡細(xì)胞早期檢測(cè)?？墒褂昧魇郊?xì)胞儀或熒光顯微鏡監(jiān)測(cè)。同時(shí)使用PI，根據(jù)細(xì)胞膜的通透性區(qū)分早期凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞。
　　
　　凋亡過程中細(xì)胞核同樣發(fā)生了結(jié)構(gòu)變化。接收到凋亡信號(hào)后,核基質(zhì)蛋白(NMPs)釋放。NMP的釋放與細(xì)胞死亡相，MERCK的CellDeathDetection(NMP)ELISA可定量檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中的NMP水平變化。此種檢測(cè)方法優(yōu)于其它方法的原因在于可以直接檢測(cè)組織培養(yǎng)基中NMPs的水平，而不需細(xì)胞總裂解物，從而避免了細(xì)胞計(jì)數(shù)和樣品準(zhǔn)備等操作。除了結(jié)構(gòu)變化，凋亡細(xì)胞*水平會(huì)降低，可通過GlutathioneApoptosisAssayKit進(jìn)行檢測(cè)。
　　
　　凋亡可被系列環(huán)境危害、發(fā)育信號(hào)等誘導(dǎo)產(chǎn)生，免疫耐受的誘導(dǎo)和保持，涉及細(xì)胞表面受體的參與。Fas(APO-1,CD95)是主要的死亡受體，在多種細(xì)胞中引發(fā)凋亡過程。Fas配體與Fas結(jié)合，激活的Fas進(jìn)而激活包含caspase在內(nèi)的幾種效應(yīng)蛋白。FAS/APO-1ELISAKit可以檢測(cè)細(xì)胞抽提物、組織培養(yǎng)物、血清中Fas的水平。同樣，F(xiàn)asLigandELISA(QIA27)可定量檢測(cè)上述各種形式樣品中的膜結(jié)合FasL和可溶性FasL。兩種檢測(cè)試劑盒都具有很好的靈敏度和度。另外兩種ELISA試劑盒都提供96孔板形式，適于高通量篩選。
　　
　　現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)幾種抑制凋亡的蛋白。Bcl-2家族是此領(lǐng)域現(xiàn)在了解zui多的一系列蛋白。Bcl-2的切割和失活可用Bcl-2ELISA監(jiān)測(cè)。已發(fā)現(xiàn)凋亡過程中Bcl-2水平降低，DNA降解片段、AnnexinⅤ的結(jié)合、NMP水平增加等。為*了解細(xì)胞凋亡，一個(gè)具體實(shí)驗(yàn)可能需要聯(lián)合應(yīng)用以上述及的幾種檢測(cè)手段以確定凋亡進(jìn)程。上海友騰生物傾力為客戶提供上萬種科研試劑，提供*、zui全、zui有效的科研試劑產(chǎn)品，質(zhì)量被全國(guó)各大院校科研機(jī)構(gòu)認(rèn)可。咨詢!同時(shí)代理IBL，DRG，R&D，HCB等品牌*試劑盒。
　　
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