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上海友騰生物科技有限公司

果膠酶活力的測定

時間:2014-3-10閱讀:377
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  本檢測方法是用來果膠酶的催化活性。本方法適用于各種固體和液體果膠酶制劑。
  
  [說明]
  
  本方法適合于果膠酶的質量分析和質量控制領域。但不是本公司產品及其它公司產品的活力的預測,而各種酶制劑的zui終的酶活力在良好的實驗操作下仍可發(fā)揮出更好的催化活力。
  
  [原理]
  
  果膠物質主要存在于植物初生壁和細胞中間,果膠物質是細胞壁的基質多糖。果膠包括兩種酸性多糖(聚半乳糖醛酸、聚鼠李半乳糖醛酸)和三種中性多糖(阿拉伯聚糖、半乳聚糖、阿拉伯半乳聚糖)。果膠酶本質上是聚半乳糖醛酸水解酶,果膠酶水解果膠主要生成β-半乳糖醛酸,可用次碘酸鈉法進行半乳醛酸的定量,從而測定果膠酶活力。
  
  [果膠酶活力單位定義]
  
  1g(或1ml液體酶)酶粉,于50.0℃、pH3.5條件下,每分鐘催化果膠水解生成1微克半乳糖醛酸的酶量為一個活力單位。
  
  1.試劑和儀器
  
  *本標準所使用所有的試劑若無任何說明,均為分析純
  
  1.1醋酸
  
  1.2碘
  
  1.3碘花鉀
  
  1.4濃硫酸
  
  1.5果膠(sigma公司)
  
  1.6*
  
  1.7碳酸鈉
  
  1.8可溶性淀粉
  
  1.9水浴鍋
  
  1.10碘量瓶
  
  2.試劑的制備
  
  2.1pH3.5的酸水
  
  用醋酸將蒸餾水調至3.5
  
  2.21%果膠溶液:
  
  準確稱取分析純果膠1g,用酸水溶解煮沸,冷卻后過濾,定至100ml。
  
  2.20.1N碘液:
  
  準確稱取*5g,用蒸餾水溶解后,加入2.54g碘,溶解后定容至100ml。
  
  2.30.025mol/L*:
  
  準確稱取6.2g*,加蒸餾水后定容至1L
  
  2.40.5%可溶性淀粉指示劑:
  
  準確稱取可溶性淀粉0.5g放入沸水中消煮至透明。
  
  2.51M碳酸鈉溶液:
  
  準確稱取10.6g碳酸鈉,定容于100ml的水中
  
  2.62N硫酸:
  
  吸10ml的濃硫酸倒入170ml的水中
  
  2.7酶樣的制備
  
  準確稱取1.000g固體酶或移取1ml液體酶樣,定容至100ml,于50℃水浴浸取1小時,過濾,濾液為供試酶液。則該酶已經稀釋100倍。
  
  3.程序
  
  3.1取1%果膠酶10ml加入5ml酶液和5ml蒸餾水(PH3.5),在50℃水浴中保溫反應1小時。
  
  3.2取出后加熱煮沸2~3min,冷卻后,補水至20ml。
  
  3.3取5ml反應液于100ml碘量瓶中,加1M碳酸鈉溶液1ml,0.1N碘液5ml,搖勻,具塞,于室溫暗處下放置20min。
  
  3.4取出后加2N硫酸2ml,立即用0.05N*溶液滴定至淺黃色,加1ml0.5%可溶性淀粉溶液,繼續(xù)滴定至藍色消失為止。
  
  3.5空白試驗以煮沸失活的酶液或蒸餾水代替酶液進行滴定。
  
  3.6每個酶樣zui少做兩個平行樣。
  
  4.計算
  
  4.1將測得的各平行樣求OD值的均值。
  
  4.2計算酶的活性單位依據(jù)以下公式
  
  酶的活力=[(B-A)*N*0.5*175*20*n*1000]/[51*52*W*60]
  
  單位:U/g(ml)
  
  式中:A:樣品滴定所消耗*的毫升數(shù)。
  
  B:空白滴定所消耗*的毫升數(shù)。
  
  N:*摩爾濃度。
  
  0.5:1當量*相當于0.5當量半乳糖醛酸。
  
  20:反應液總體積
  
  51:酶液體積以1ml計
  
  52:吸取反應液
  
  n:稀釋倍數(shù)
  
  W:酶粉重量g或酶液體積ml
  
  隨機推薦
  
  •果膠酶活力的測定
  
  乙試劑稱取鉬酸銨[(NH4)MO7O24•4H2O]25g溶于450mL水中,再緩慢加入濃硫酸21mL。另取25mL水,溶解純結晶shen酸二鈉(Na2HAsO4•7H2O)3g(可用H4As2O71.28g,以1mol/LNaOH19.24mL溶解,再加水4.75mL代替此液)。然后慢慢加入上述溶液中,充分混合,在37℃放置24~48h,
  
  •地高辛注射液_
  
  激動心肌收縮蛋白從而增加心肌收縮力,2負性頻率作用:由于其正性肌力作用,使衰竭心臟心輸出量增加,血流動力學狀態(tài)改善,消除交感神經張力的反射性增高,并增強迷走神經張力,因而減慢心率,此外,小劑量時提高竇房結對迷走神經沖動的敏感性,可增強其減慢。
  
  •濃縮透明紅葡萄汁
  
  如果用6000轉/分,定額為5000升/小時的離心分離機,只達到3600升/小時的分離效率就比較滿意。7.滅酶:分離果醬以后的葡萄汁仍然是混濁汁,此時帶酶果汁用平板熱交換器或管式消毒器滅酶、滅酶條件85℃,15秒。滅酶后立。
  
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