1、滅菌過程的某些環(huán)節(jié)
原方法存在問題：一是捆扎的試管管口豎放, 滅菌結(jié)束又冷卻10min, 高壓鍋蓋上的冷凝水, 容易打濕棉塞, 為雜菌污染創(chuàng)造條件。二是排除冷空氣的操作不安全，鍋內(nèi)有壓力時(shí)排除冷空氣, 由于內(nèi)外的壓力差, 容易沖掉棉塞, 而且需要2次操作, 更增加了不安全的因素。
改進(jìn)方法：1）在豎放的試管上放少量棉花, 使之弓起成饅頭形, 上用聚丙烯薄膜蓋好, 四周的薄膜要置于試管與內(nèi)鍋內(nèi)壁之間。2）加溫后, 就把放氣閥打開, 當(dāng)有水蒸汽冒出, 持續(xù)2~3分時(shí), 關(guān)閉放氣閥。上述做法優(yōu)點(diǎn)：一是高壓鍋蓋上的冷凝水可沿凸起的薄膜流人內(nèi)鍋底, 薄膜少量的冷凝水可被放置的棉花吸收, 這樣可保持棉塞的干燥。二是只需1次操作, 就能*排除冷空氣, 且安全可靠。
2、擱置斜面
原方法存在問題：從高壓鍋內(nèi)剛?cè)〕龅脑嚬? 棉塞未干就擺斜面, 容易沾雜菌抱子而染雜；而且溫度在迅速下降的過程中, 會(huì)使試管壁上形成冷凝水, 對(duì)菌絲生長不利。
改進(jìn)辦法：1）滅菌結(jié)束后, 鍋內(nèi)余水, 用虹吸管抽出。2）操作者戴濕手套將整捆試管疊放于鍋內(nèi)的木條上, 所擺斜面的長度同教材。3）蓋上鍋蓋, 稍留縫隙, 放在火上加熱片刻以烘干棉塞。4）培養(yǎng)基緩慢冷卻后, 直接放人接種箱內(nèi)。
3、培養(yǎng)基的分裝
原方法存在問題：分裝時(shí)間長時(shí), 瓊脂易凝固, 還需要再加熱、再分裝, 工序麻煩，每管分裝的數(shù)量靠眼去把握, 容易出誤差操作須特別小心, 稍不留意培養(yǎng)基就會(huì)沾在管口或管壁上。
改進(jìn)方法：將配好的培養(yǎng)基倒入方形盤內(nèi), 待其自然冷卻后, 用小刀切成相等的方塊再分別裝人試管內(nèi)。這樣培養(yǎng)基不沾污管口和管壁、分裝量可自由調(diào)整, 且不受溫度限制, 能保證分裝均勻, 單人、多人均可操作。
4、加棉塞
原方法存在問題：沒有闡述棉塞的制作方法, 學(xué)生不知道如何制作, 也沒有闡述合格棉塞的標(biāo)準(zhǔn), 學(xué)生制作時(shí), 把握不住棉塞的松緊度。
改進(jìn)方法：棉塞的制作, 取適量的棉花根據(jù)試管的大小確定, 做成均勻的方片、將相鄰的邊分別折疊一下, 再卷成1個(gè)棉柱, 將有毛茬的一端折轉(zhuǎn)平貼在棉柱上, 并把此端塞入試管口2/3, 管外部分不少于1cm。檢查棉塞的松緊度：將棉塞提起, 試管跟著被提起而不下滑, 表明棉塞不松；將棉塞拔出, 可聽到輕微的聲音, 表明棉塞不緊。
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