中文說明書 UNIONHONEST
本品僅供研究使用 酶聯免疫吸附測試 Enzyme linked lmmunosorbent Assay
牛DNA甲基轉移酶1(DNMT1)ELISA檢測試劑盒
用 途： 用于牛血清、血漿及相關液體樣本中DNA甲基轉移酶1(DNMT1)的測定。
檢測原理
本試劑盒采用的是*雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）測定樣品中牛DNA甲基轉移酶1(DNMT1)的水平。向預先包被了牛DNA甲基轉移酶1(DNMT1)單克隆抗體的酶標孔中加入DNA甲基轉移酶1(DNMT1)，溫育；溫育后，加入*標記的抗DNA甲基轉移酶1(DNMT1) 抗體，再與鏈霉親和素-HRP結合，形成免疫復合物，再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶，然后加入底物A、B，產生藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中牛DNA甲基轉移酶1(DNMT1)的濃度呈正相關。
牛DNA甲基轉移酶1(DNMT1)ELISA檢測試劑盒組成
| 名 稱 | 96孔配置 12孔×8條 | 48孔配置 12孔×4條 | 備 注 |
1 | 標準品（40U/ml) | 0.5ml | 0.5ml | 稀釋即用型 |
2 | 酶標包被板 | 1塊 | 1塊 | 已包被即用型 |
3 | 標準品稀釋液 | 3ml | 3ml | 即用型 |
4 | 鏈霉親和素-HRP | 6ml | 3ml | 即用型 |
5 | 30x倍濃縮洗滌液 | 20ml | 20ml | 蒸餾水稀釋 |
6 | *標記的抗DNA甲基轉移酶1(DNMT1) 抗體 | 2ml | 2ml | 即用型 |
7 | 顯色劑A液 | 6ml | 3ml | 即用型 |
8 | 顯色劑B液 | 6ml | 3ml | 即用型 |
9 | 終止液 | 6ml | 3ml | 即用型 |
10 | 說明書 | 1份 | 1份 | 即用型 |
11 | 封板膜 | 2張 | 2張 | 不可反復使用 |
12 | 密封袋 | 1個 | 1個 | 即用型 |
需要而未提供的試劑和器材
- 酶標儀(450nm檢測波長濾光片，570nm或630nm校正波長濾光片) 。
- 洗板機（可調注液量，保證每孔洗液加至0.35ml而不溢出）。
- 超凈工作臺，生物安全柜，通風柜。
- 高精度單道加液器（量程為0.5-10μl, 2-20μl,20-200μl,200-1000μl).
- 高精度多道加液器（8道或12道，量程為50-300μl).
- 37℃恒溫箱。
- 低溫離心機。
- 電冰箱（4℃,-20℃,-86℃）.
9. 漩渦混合儀，低頻振蕩器等
牛DNA甲基轉移酶1(DNMT1)ELISA檢測試劑盒注意事項
- 從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
- 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。
- 為避免交叉污染，要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。
- 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
- 底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。
6. 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按生物廢棄物處理。終止液為2M硫酸，使用時必須注意安全。
7. 各步驟加樣均應使用加樣器，并經常校準其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
8. 每次試驗測定的同時做標準曲線，。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔zui高濃度的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n）。
9. 配制試劑時，要用旋渦混合儀混勻。加入孔內的試劑，充分混勻對測試結果尤為重要，使用微量振蕩器(使用zui低頻率)，如無微量振蕩器，可在反應前手工輕輕晃動酶標板1分鐘，例如做圓周動作，使加入孔中的反應液混勻。
10. 實驗用酶標儀應嚴格按使用說明書規(guī)范操作，并在使用前充分預熱。
11. 手工洗板應注意：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重復此過程數次。自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
牛DNA甲基轉移酶1(DNMT1)ELISA檢測試劑盒樣本要求
1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存或根據存放，時間做相應溫度調整，但應避免反復凍融，（由于樣本種類過多，每個單位處理方式不一樣，本說明書不做詳細介紹）。
操作程序
- 標準品的稀釋：（本試劑系統(tǒng)提供原倍標準品一支，用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋）按下表格執(zhí)行：
20U/ml | （5號標準品） | 120μl的原倍標準品加入120μl的標準品稀釋液 |
10U/ml | （4號標準品） | 120μl的5號標準品加入120μl的標準品稀釋液 |
5U/ml | （3號標準品） | 120μl的4號標準品加入120μl的標準品稀釋液 |
2.5U/ml | （2號標準品） | 120μl的3號標準品加入120μl的標準品稀釋液 |
1.25U/ml | （1號標準品） | 120μl的2號標準品加入120μl的標準品稀釋液 |
- 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。
- 加樣：1）空白孔：（空白對照孔不加樣品，*標記的抗DNA甲基轉移酶1(DNMT1)抗體，鏈霉親和素-HRP，其余各步操作相同 ；2）標準品孔:加入標準品50μl，鏈霉親和素-HRP50μl（標準品中已事先整合好*標記抗體，故在操作時不加，只加*-HRP）；3）樣本反應孔：加入樣本40μl，然后各加入抗DNA甲基轉移酶1(DNMT1)抗體10μl、鏈霉親和素-HRP（空白孔除外）50μl。蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫育60分鐘。
- 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋備用。
- 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
- 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。
- 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
- 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后10分鐘以內進行。
結果判斷
1. 每個標準品和標本的OD值應減去零孔的OD值。（若不減零孔值，標準曲線的零孔應相交于Y軸）
2. 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種熟悉應用軟件來計算。
3．手工繪制標準曲線。以標準品濃度作橫坐標，OD值作縱坐標，以平滑線連接各標準品的坐標點。通過標本的OD值可在標準曲線上查出其濃度。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進行分析計算結果。
4．若標本OD值高于標準曲線上限，應適當稀釋后重測，計算濃度時應乘以稀釋倍數。
操作總結
準備試劑，樣品和標準品
加入準備好的樣品和標準品，*標記二抗和酶標試劑，37℃反應60分鐘。
洗板5次，加入顯色液A、B,37℃顯色10分鐘
加入TMB終止液
10分鐘內酶標儀測OD值
計算待測樣本因子含量
試劑盒性能
- 準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值，大于等于0.9200。
- 靈敏度：zui小可檢測濃度達，0.078U/ml。
- 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
- 重復性：板內、板間變異系數均小于15%。
5 . 回收率：70-110%.
6. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
7. 有效期：6個月
8. 檢測范圍：38U/ml -0.312U/ml
