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人輪狀病毒IgA(RV-IgA)ELISA試劑盒說明書

閱讀:172發(fā)布時(shí)間:2015-11-4

人輪狀病毒IgA(RV-IgA)酶聯(lián)免疫分析

試劑盒使用說明書

人輪狀病毒IgA(RV-IgA)ELISA試劑盒說明書

    本試劑盒僅供研究使用。                                            48T

藥品名稱: 
通用名:人輪狀病毒 IgA(RV-IgA )酶聯(lián)免疫分析試劑盒 
使用目的: 
    本試劑盒定性測(cè)定人血液、或其它相關(guān)組織中輪狀病毒 IgA(RV-IgA )。 
實(shí)驗(yàn)原理: 
    本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA )測(cè)定標(biāo)本中人輪狀病毒IgA(RV-IgA )。 
用純化的輪狀病毒 IgA(RV-IgA )抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中輪狀病毒 
IgA(RV-IgA )抗原相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP 標(biāo)記的輪狀病 
毒 IgA(RV-IgA )抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 
顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀 
在 450nm 波長下測(cè)定吸光度(OD 值),與 CUTOFF 值相比較,從而判定標(biāo)本中人輪狀病毒 
IgA(RV-IgA )的存在與否。 
試劑盒組成:

  1   20 倍濃縮洗滌液         20ml ×1 瓶    7   終止液                      3ml ×1 瓶

  2   酶標(biāo)試劑              3ml ×1/瓶     8   陽性對(duì)照                     0.5ml ×1 瓶

  3   酶標(biāo)包被板             12 孔×4 條     9   陰性對(duì)照                     0.5ml ×1 瓶

  4   樣品稀釋液             3ml ×1 瓶     10  說明書                      1 份

  5   顯色劑 A 液           3ml ×1 瓶     11  封板膜                      2 張

  6   顯色劑 B 液           3ml ×1 瓶     12  密封袋                      1 個(gè)

標(biāo)本要求: 
    1.標(biāo)本處理:血清、血漿標(biāo)本可直接檢測(cè) 
    2 .標(biāo)本按要求制備后盡早進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。如不能及時(shí)檢測(cè),可將標(biāo)本在-20℃保存一個(gè)月, 
       但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 
    3.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP )活性。 
操作步驟: 
1.  編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照 1 
    孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同) 
2.  加樣:分別在陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照(標(biāo)準(zhǔn)品)50μl。然后在待測(cè) 
    樣品孔先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測(cè)樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部, 
    盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻, 
3.  溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30 分鐘。 
4.  配液:將 30 倍濃縮洗滌液加蒸餾水至 600ml 后備用 
5.  洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此 
    重復(fù) 5 次,拍干。 
6.  加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。 
7.  溫育:操作同 3 。 
8.  洗滌:操作同 5。 
9.  顯色:每孔先加入顯色劑 A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色 
    15分鐘 
10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。 
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止 
    液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

人輪狀病毒IgA(RV-IgA)ELISA試劑盒說明書

結(jié)果判定: 
    試驗(yàn)有效性:陽性對(duì)照孔平均值≥1.00;  陰性對(duì)照平均值≤0.15 
    臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值= 陰性對(duì)照孔平均值+0.15 
    陰性判定:樣品OD 值<          臨界值(CUT OFF)者為輪狀病毒IgA(RV-IgA )陰性 
    陽性判定:樣品OD 值≥ 臨界值(CUT OFF)者為輪狀病毒IgA(RV-IgA )陽性 
注意事項(xiàng) 
1.操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,本試劑不同批號(hào)組分不得混用。 
2 .試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未 
   用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 
3 .濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。 
4 .封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 
5 .底物請(qǐng)避光保存。 
6 .試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長檢測(cè)時(shí),參考波長為630nm 
7 .所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M  的硫酸,使用時(shí)必須 
   注意安全。

保存條件及有效期 
1.試劑盒保存:;2-8℃。 
2 .有效期:6 個(gè)月 
人輪狀病毒IgA(RV-IgA)ELISA試劑盒說明書


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