馬鈴薯Y病毒一步RT-PCR檢測(cè)試劑盒的研制

馬鈴薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)對(duì)馬鈴薯的危害zui大,可導(dǎo)致馬鈴薯退化,降低馬鈴薯產(chǎn)量。解決這一問題的重要途徑就是培養(yǎng)脫毒種薯,但是否*脫毒需要經(jīng)過檢測(cè)才能證實(shí)。本 研究依據(jù)PVY CP基因序列設(shè)計(jì)合成了一對(duì)引物PY1、PY2,以帶毒樣品植物總RNA為模板,在同一個(gè)反應(yīng)中同時(shí)加入反轉(zhuǎn)錄和PCR反應(yīng)所需試劑,反應(yīng)程序中包括反轉(zhuǎn) 錄和PCR反應(yīng)所需條件,進(jìn)行反應(yīng)擴(kuò)增,帶毒樣品擴(kuò)增得到340 bp的目的條帶,而健康對(duì)照無此目的條帶,從而建立了PVY的一步RT-PCR檢測(cè)技術(shù),并組裝成試劑盒。該試劑盒具有良好的穩(wěn)定性和特異性,靈敏度可以 檢測(cè)到帶毒植物組織下限的6.25μg,高于ELISA(100μg)和NASH(15μg)的靈敏度,雖然和常規(guī)方法的靈敏度相同,但更為快速、簡(jiǎn)便、 易于操作,適合脫毒苗和脫毒種薯生產(chǎn)單位做大量樣品的檢測(cè)。