對(duì)于剖析ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)測(cè)定效果因素總結(jié)

血清是zui常用的ELISA標(biāo)本，血漿通常可視為與血清平等的標(biāo)本，ELISA試劑盒標(biāo)本致使的假陽性和假陰性成果主要是攪擾性物質(zhì)所構(gòu)成的，分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種：

1． 內(nèi)源性物質(zhì)
普遍認(rèn)為大概40%的人血清標(biāo)本中富含非特異性攪擾物質(zhì)，能夠不一樣程度影響檢查成果。多見的攪擾物質(zhì)有：類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異性抗體、嗜靶抗原本身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig （s）抗體、穿插反響物質(zhì)和其它物質(zhì)等。

（1）類風(fēng)濕因子
人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子（RF）能夠與ELISA體系中的捕獲抗體及酶符號(hào)二抗的FC段直接，然后致使假陽性。處理該狀況的方法是：①用F（ab）2代替完好的IgG；②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性（63℃，10 min）IgG的固相吸附劑處理（將熱變性IgG參加到標(biāo)本稀釋液中同樣有用）；③檢查抗原時(shí)，能夠用2-巰基乙醇等參加到標(biāo)本稀釋液中，使RF降解。
（2）補(bǔ)體
ELISA體系中固相一抗和符號(hào)二抗過程中，抗體分子發(fā)作變構(gòu)，其FC段的補(bǔ)體C1q分子位點(diǎn)被露出出來，使C1q 能夠?qū)⒍哌B接起來，然后構(gòu)成假陽性。處理的方法是：①用EDTA稀釋標(biāo)本；②用53℃，10 min或56℃，30 min加熱血清使C1q滅活。
（3）嗜異性抗體
人類血清中富含能與嚙齒類動(dòng)物（如鼠等）Ig （s） 的天然嗜異性抗體，可將ELISA體系中一抗和二抗連接起來，也能構(gòu)成假陽性。處理的方法是：可在標(biāo)本稀釋液中參加過量的動(dòng)物Ig （s） ，但參加量缺乏或亞類不一樣時(shí)無效。
（4）嗜靶抗原的本身抗體
抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的本身抗體，ELISA試劑盒有時(shí)能與靶抗原構(gòu)成復(fù)合物，在ELISA方法中均可攪擾抗原抗體測(cè)定成果。為防止以上狀況呈現(xiàn)，處理的方法是：測(cè)定前需用理化方法將其解離后再測(cè)定。
（5）醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig （s） 抗體
臨床展開的用鼠源性CD3等單克隆抗體醫(yī)治，用放射性同位素符號(hào)鼠源性抗體的印象確診及靶向醫(yī)治等新技術(shù)，均有可能使這些患者體內(nèi)發(fā)生抗鼠抗體；別的，被鼠等嚙齒類動(dòng)物咬傷的患者體內(nèi)也能夠發(fā)生抗鼠Ig （s） 抗體。這些患者ELISA測(cè)守時(shí)均可發(fā)生假陽性。處理的方法是：測(cè)定抗原時(shí)，在標(biāo)本中參加充足的正常鼠Ig （s） ，然后戰(zhàn)勝因?yàn)樯鲜鲆貥?gòu)成的假陽性。
（6）穿插反響物質(zhì)
類AFP樣物質(zhì)等，是與靶抗原有穿插反響的物質(zhì)。在用多抗測(cè)定抗原時(shí)對(duì)測(cè)定成果影響不大，但在用單克隆抗體測(cè)定抗原時(shí)，假如穿插抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對(duì)應(yīng)的靶決定簇時(shí)，也會(huì)呈現(xiàn)假陽性成果。
（7）標(biāo)本中其它成分的影響 血清脂質(zhì)過高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過大等，均對(duì)ELISA測(cè)定成果有攪擾效果。

2． ELISA試劑盒外源性物質(zhì)
外源性物質(zhì)常常是因?yàn)橛糜贓LISA測(cè)定的血標(biāo)本的收集、儲(chǔ)存不妥等要素所構(gòu)成的。如標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本儲(chǔ)存過久、標(biāo)本凝聚不全和采血管中增加物等影響。
（1）標(biāo)本溶血 
因?yàn)楦鞣N人為要素致使的標(biāo)本溶血，均可因紅細(xì)胞損壞溶解時(shí)釋放出很多具有過氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過氧化物酶為符號(hào)的ELISA測(cè)定中，會(huì)致使非特異性顯色，攪擾測(cè)定成果。為戰(zhàn)勝上述攪擾效果，標(biāo)本收集時(shí)有必要留意防止溶血。
（2）標(biāo)本受細(xì)菌污染 
因菌體中可能富含內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因而，被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣，亦可發(fā)生非特異性顯色而攪擾測(cè)定成果。
（3）標(biāo)本保留不妥
在冰箱中保留過久的標(biāo)本，血清中IgG可聚組成多聚體、AFP可構(gòu)成二聚體，在間接法ELISA測(cè)定中會(huì)致使本底過深、乃至構(gòu)成假陽性；標(biāo)本放置時(shí)刻過長(zhǎng)（如一天以上），有時(shí)抗原或抗體免疫活性減弱，亦可呈現(xiàn)假陰性。為戰(zhàn)勝上述攪擾，ELISA測(cè)定的血清標(biāo)本宜為新鮮收集；如不能當(dāng)即測(cè)定，5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可存放于4℃，1周后測(cè)定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存；凍存后融解的標(biāo)本，蛋白質(zhì)有些濃縮，散布不均，應(yīng)充沛混合后再測(cè)定，但混勻時(shí)應(yīng)輕柔，不行激烈振動(dòng)。
（4）標(biāo)本凝聚不全
在沒有促凝劑和抗凝劑存在的狀況下，正常血液收集后1/2~2h開端凝結(jié)，18~24h*凝結(jié)。臨床查驗(yàn)工作中，有時(shí)為了爭(zhēng)取時(shí)刻迅速檢查，常在血液還未開端凝結(jié)時(shí)即強(qiáng)行離心別離血清，此刻的血清中仍殘留有些纖維蛋白原，在ELISA測(cè)定過程中能夠構(gòu)成肉眼可見的纖維蛋白塊，易構(gòu)成假陽性成果；這類狀況于次日復(fù)查時(shí)因血凝已*，血清中不再有纖維蛋白原存在，故復(fù)查成果變?yōu)殛幮?。為防止上述攪擾效果，處理的方法是血液標(biāo)本收集后有必要使其充沛凝結(jié)后再別離血清，或標(biāo)本收集時(shí)用帶別離膠的采血管或于采血管中參加恰當(dāng)?shù)拇倌齽?br />（5）標(biāo)本管中增加物質(zhì)的影響
抗凝劑（如肝素，EDTA）、酶抑制劑（如NaN3可抑制ELISA體系中辣根過氧化物酶活性）及迅速別離血清的別離膠等均對(duì)ELISA測(cè)定有必定攪擾效果。
經(jīng)過以上的剖析和總結(jié)，ELISA試劑盒查驗(yàn)ELISA測(cè)定中呈現(xiàn)假陽性或假陰性等錯(cuò)誤的成果，掃除要素和操作要素，再有即是從標(biāo)本要素進(jìn)行剖析，并應(yīng)采納相應(yīng)措施掃除攪擾，然后保證檢查成果的準(zhǔn)確性。