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酶標(biāo)儀的測(cè)定波長(zhǎng)選擇

時(shí)間:2014-8-12閱讀:6116
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酶標(biāo)儀的標(biāo)準(zhǔn)配置包括405nm,450nm630nm三塊濾光片,具有紫外功能的酶標(biāo)儀還配備有340nm.

目前用于酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定,zui常使用的標(biāo)記用酶是辣根過氧化物酶(HRP),對(duì)應(yīng)的底物通常為四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD)。底物在*的存在下,經(jīng)辣根過氧化物酶作用,分別氧化為2,2,—二氨基偶氮苯(DAB)和聯(lián)苯醌。

鄰苯二胺(OPD)的氧化產(chǎn)物DAB, pH值為50左右時(shí),在450nm波長(zhǎng)處有zui大吸收,此時(shí)可用450nm的濾光片測(cè)定吸光值。當(dāng)加入強(qiáng)酸作為終止試劑終止反應(yīng)時(shí),pH值降到接近0,此時(shí)zui大吸收波長(zhǎng)移至492 nm,此時(shí)可用492nm的濾光片測(cè)定吸光值。

四甲基聯(lián)苯胺(TMB)的氧化產(chǎn)物聯(lián)苯醌,一般在波長(zhǎng)為450nm處有zui大消光系數(shù)。使用硫酸作為終止劑可使產(chǎn)物穩(wěn)定90min,便于檢測(cè)。

因此,450nm492 nm兩個(gè)波長(zhǎng)是目前ELISA測(cè)定zui常用的。有的酶標(biāo)儀以490nm濾光片替代492nm濾光片,影響不大。

除了這兩個(gè)基本濾光片外,考慮到雙波長(zhǎng)比色的需要,還應(yīng)有620nm630nm650nm405nm波長(zhǎng)的濾光片,雙波長(zhǎng)比色主要用于消除非特異干擾的影響。

如果實(shí)驗(yàn)需要用酶標(biāo)儀作微量生化測(cè)定,就需要擴(kuò)展紫外檢測(cè)功能,此時(shí)需要一個(gè)340 nm波長(zhǎng)濾光片。

總之,以上介紹的是常用的幾個(gè)波長(zhǎng)的濾光片,用戶還可以根據(jù)自己的需求選擇其他波長(zhǎng)的濾光片。一般各種酶標(biāo)儀都配有放置濾光片的可自動(dòng)轉(zhuǎn)換的部件,可以同時(shí)安裝68片濾光片,可以滿足用戶的不同需求。

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